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用1%胆酸钠和15%孢和硫酸铵相结合的方法,从牛脑皮层细胞膜中抽提得到主要含激活型G-蛋白和腺苷酸环化酶两种蛋白组分的制剂,然后通过Sepharose6B柱将两者分开,将含Gs高活力的级分用庚胺-Sepharose4B柱进一步分离,即可获得高活力的Gs,SDS-PAGE显示为分子量45000和36000的两条蛋白带,该法具简便,快速,重复性好、产率高等优点,且可同时获得无Gs污染的AC。用无Gs污 相似文献
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用1%胆酸钠和20%饱和度的硫酸铵抽提牛脑皮层细胞膜得到含G蛋白和腺苷酸环化酶(AC)的制剂,通过Sepharose6B柱将两者分开,再将含G蛋白的级分用庚胺-Sepharose4B疏水柱、羟基磷灰石柱将其它亚型的G蛋白(主要是Gs和Go)从抑制型G蛋白(Gi)中除去,获得纯化的高活力的Gi,其GTP结合活力为17.6nmol/mg,比细胞膜Gi活力提高50倍;并具有较高的产率,从1g膜蛋白中可获得0.66mg的Gi,同时可获得无G蛋白污染的AC和少量的Gs蛋白.SDS-PAGE显示分子量为41000和36000的两条蛋白带,证实是Gi的α基和β亚基.进一步用重建脂酶体的方法检测Gi对AC的抑制作用,结果显示Gi对AC活力的抑制达40%左右,表明CAMP信息跨膜转导通路中Gi与AC之间具有较好偶联功能. 相似文献
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用1%胆酸钠和15%饱和硫酸铵相结合的方法,从牛脑皮层细胞膜中抽提得到主要含激活型G-蛋白(Gs)和腺苷酸环化酶(AC)两种蛋白组分的制剂,然后通过Sepharose 6B柱将两者分开.将含Gs高活力的级分用庚胺-Sepharose 4B柱进一步分离,即可获得高活力的Gs,SDS-PAGE显示为分子量45 000和36 000的两条蛋白带.该法具有简便、快速、重复性好、产率高等优点,且可同时获得无Gs污染的AC.用无Gs污染的AC脂酶体测定Gs活力亦简便、可靠、灵敏度高. 相似文献
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