幽门螺杆菌重组HpaA蛋白包涵体的切胶纯化分析

目的 探讨切胶纯化的最佳条件及纯化重组HpaA蛋白包涵体的可行性.方法 克隆并表达pQE30-hpaA-DH5α工程菌,获得重组HpaA蛋白包涵体,使用切胶纯化法进行纯化,得到可溶性的重组HpaA蛋白.SDS-PAGE电泳后使用不同浓度、不同pH的醋酸钠溶液以及不同的染色时间染色电泳蛋白条带,分析切胶纯化的最佳条件.Western blot鉴定重组HpaA蛋白的抗原性.将重组蛋白免疫BALB/c小鼠,双向免疫扩散法检测血清抗HpaA抗体,鉴定重组蛋白的免疫原性.结果 4 mol/L醋酸钠溶液、pH 13.0、作用1 h为切胶纯化的最佳条件.经切胶纯化法获得的重组HpaA蛋白体积为6 ml,浓度为0.2942 mg/ml,蛋白量为1.7652 mg,得率为77.1%,Western blot显示该蛋白具有良好的抗原性.小鼠免疫血清能与重组HpaA蛋白反应,双扩效价大于等于1∶ 16,具有良好的免疫原性.结论 切胶能够纯化重组HpaA蛋白包涵体,获得高纯度的可溶性重组HpaA蛋白,该蛋白具有良好的抗原性和免疫原性,可用于进一步的科学研究.