X射线对比剂α-乙基-2,4,6-三碘-和三溴-3-氨基肉桂酸的初步研究报告

X射线对比剂在临床诊断上占有极重要的地位,自1940年Dohrn和Diedrich在许多有机碘化物中发现α-苯基-β-(3,5-二碘-4-羟苯基)丙酸(Priodax)(Ⅰ)可供临床胆囊造影後,即开始了有关这类药物的研究。依据(Ⅰ)的化学构造曾合成了一系列的类似化合物,希望能找到更适宜的胆囊对比剂。Lewis等和Papa等在研究含有三碘的丙酸     

大肠杆菌可溶性核糖核酸的研究 Ⅲ.可溶性核糖核酸5’-磷酸单酯末端核苷酸的排列

(1)比较了E.coli DNP-S-RNA和S-RNA的紫外光谱,并研究了DNP-S-RNA的RNase I的降解条件,结果表明两者无显著差别。(2)对DNP-S-RNA的RNase I降解产物的双向电泳层析图谱进行了分析,并与S-RNA图谱进行了比较,两者图谱中光吸收点的分布一致,相应点经洗脱后,由光谱分析与核碱组成测定证明均含有相同的核苷酸组成。(3)在DNP-S-RNA和S-RNA于同一条件下得到的图谱中,前者的某些光吸收点中含有不同量的DNP-。根据DNP-可以标记S-RNA末端5′-磷酸单酯,分析了DNP-结合物,说明在E.coli S-RNA分子中,B末端核苷酸除pGp…以外,尚有pAp…,pCp…以及痕量的pUp…。和末端相邻的核苷酸排列形式,随特异S-RNA而有不同,有pGpUp…,pGpCp…,p(GpGpAp)Up…,p(GpAp)Up…+pGpGpUp…,p(GpAp)Cp…,pApUp…和pApCp…。其他四核苷酸以上多核苷酸未分析。由于电泳和层析后原点部分标记了DNP-,估计末端核苷酸排列有五、六核苷酸以上的多嘌呤核苷酸的排列形式,其中以G为主。     

核酸碱基组成分析方法的研究 Ⅰ.RNA和DNA中尿嘧啶和胸腺嘧啶的直接分光光度测定法

测定核酸中的碱基组成对核酸的研究工作有重要的意义。文献中报告测定尿嘧啶和胸腺嘧啶的方法很多。其中,借与试剂呈色的比色法,利用放射性标记物的同位素稀释法等均受到一定程度测定条件的限制,实际上较少采用。目前应用最广的是分光光度测定法;即在不同条件下使核酸降解,用纸层析、离子交换柱层离、电泳等方法将降解物分离,再分别测定各分离物在紫外线区域一定波长处的光密度值。Hotchkiss     

大腸杆菌可溶性核糖核酸的提取及其性质的研究

大腸杆菌經酚直接抽提后以硫酸銨处理,可以得到在电泳与超速离心图譜上均一的, 具有单一末端及接受甲硫氨酸活力較高的sRNA。对sRNA制品的蛋白貭,DNA,多糖含量,比旋光度,紫外光吸收光譜,克原子磷消光系数,核碱組成与链长也进行了测定。     

核酸碱基组成分析方法的研究 Ⅲ.脱氧核糖核酸嘌呤和嘧啶衍生物直接分光光度测定法

利用核碱在一定pH条件下产生构并表現出不同的紫外綫吸收的特点,本文提出了一种測定提純DNA核碱組成的直接分光光度的方法,测定方法簡易,测定时間远較其他測定方法为短,A,G,C,T四种核碱的回收率为94—106%。     

核酸碱基组成分析方法的研究——Ⅱ.核糖核酸中嘌呤和嘧啶衍生物的直接分光光度测定法

(一)核酸碱基在—定pH情况下产生(?)构并表現出不同的紫外綫吸收的特性。利用pH1和pH13的溶剂条件,在AGCU四种混合碱基体系中,由不同两处波长的光密度差值,可以求解出其中每种碱基的含量。本方法适用于合有AGCU四种碱基的提純核糖核酸样品,测定步驟簡单,重复性恆定,回收率在94～106%之間。(二)核酸样品經过氯酸降解后,降解液用蒸餾水稀释至相当于2.0N HClO_4的浓度。离心,吸取一定量的上清液,分別加入标准的HCl及NaOH溶液,調整酸碱度至相当于0.10N HCl(pH1)及0.10N NaOH(pH13)。酸液在249mμ,262mμ,274mμ和290mμ处,碱液在256mμ,258mμ,282mμ和290mμ处,分別用分光光度計测定光密度。测定溶液的适宜总浓度为60～160微克/5.0毫升。按下列公式計算混合体系中碱基的含量。U=0.194·△D(290_(13))-290_1·V A=0.108·△D_(262_1-282_(13))·V—0.221U G=0.198·△D_(249_1-258_(13))·V—0.542U C=0.127·△D_(274-256_(13))·V—0.133U AGCU为碱基的微克分子,V为測定溶液的体积毫升数。(三)核酸样品經1.0N HCl降解后,在嘌呤碱基和嘧啶核苷酸的混合体系內,可按以下公式求出胞嘧啶核苷酸或胞嘧啶含量。C=0.149·△D_(290_1-290_(13))·V C为碱基的微克分手数,V为测定溶液体积的毫升数。(四)在四种碱基不同时存在的体系中,本方法可用作为鉴定体系中的主要碱基种类,并可得到所合碱基的近似含量。     

核酸化学结构的研究——Ⅰ.1-氟-2,4-二硝基苯与可溶性核糖核酸的反应

(一)本工作报告了FDNB与RNA的作用条件,并研究了不同断裂程度的RNA和FDNB的反应。(二)对DNP-在大肠杆菌S-RNA分子中的结合位置通过紫外线吸收光谱和牛胰RNase以及蛇毒磷酸双酯酶的降解作用做了探讨,由实验结果推断:DNP-似结合在S-RNA末端5′-G核苷酸的磷酸单酯上。(三)本文说明DNP-的结合量可以用来计算S-RNA的链长及分子量;也可以利用DNP-标记pG末端,以便利于该末端核苷酸排列顺序的研究。     

大肠杆菌可溶性核糖核酸结构的研究 Ⅰ.可溶性核糖核酸的结构分析和一种测定核苷酸分布的方法

(一)利用不同工具酶和化学因素对于核酸的特异降解作用,提出一种简便的系统分析S-RNA RNase I降解物的方法。方法共分四个步骤,连续在纸上进行,可以测定末端以及—PypCpNp—,—PypUpNp—,—PypApNp—,—PypGpNp—,—PupApNp—,—PupGpNp—,—PupCpNp—,—PupUpNp—在核酸链中的分布。(二)对大肠杆菌S-RNA的内部结构进行了分析,得到以下结论:(1)在S-RNA链中,嘧啶或嘌呤核苷酸有“成堆”的排列。属于这种排列的核苷酸,嘧啶占总嘧啶量的56.5%;嘌呤占总嘌呤量的56.4%。(2)S-RNA经RNase I降解后多核苷酸片段(Pup)_nPyp中,嘧啶端C>U,C/U比值为1.5;嘌呤端G>A,G/A比值为1.2。(三)大肠杆菌S-RNA根据本方法分析结果计算,由76±1核苷酸残基组成(未包括(?)Up),分子量约为25000±1000,与应用核碱组成分析计算的结果基本符合。(四)根据—PupCpNp—与—PypGpNp—以及—PupUpNp—与—PypApNp—的测定值基本相同一点,讨论了S-RNA双螺旋结构,核碱成G—C、A—U对排列的可能性。并估计在S-RNA链中,少数不成对排列的碱基,可能分布于嘧啶或嘌呤“成堆”的链节中。     

大肠杆菌可溶性核糖核酸结构的研究 Ⅱ.可溶性核糖核酸的RNase Ⅰ降解产物的双向电泳层析图谱

(一)应用双向电泳层析图谱法分析了大肠杆菌S-RNA的RNase I降解产物。结果表明成堆排列的嘧啶核苷酸占核酸重量的17.1%;二核苷酸占12.7%。成堆排列的嘧啶约占嘧啶总量的45—60%左右,证明在S-RNA分子中核苷酸的分布是不均一的。(二)在76个核苷酸链中成堆排列的嘧啶核苷酸残基,—PypCpNp—,—PypUpNp—分别是13.7和5.5;在低聚核苷酸中,—GpCp—,—ApCp—,—GpUp—和—ApUp—分别是2.5,2.O,1.4和1.1。Pyp(?)Up占1.1。(三)核苷酸在S-RNA链中的排列形式不符合按无规排列的计算结果,说明核苷酸的排列具有一定程度的规律性。     

1-氟-2,4-二硝基苯对于核酸降解物的反应和产物性质的研究

(一)本文提出FDNB与核酸降解物的反应条件,并制备了DNP-尿嘧啶,DNP-胸腺嘧啶和DNP-尿嘧啶核苷等新化合物。(二)研究了化合物紫外綫和紅外綫吸收光譜,并与反应前作比較和探討了这些化合物的結构。(三)对化合物在不同推进剂下的层析行为,以及不同酸碱条件下的稳定性进行了研究。DNP-結合物在酸性溶液中較在碱性溶液中稳定。(四)DNP-尿嘧啶核苷在稀碱溶液中可以呈色,5—10微克可借0.1N NaOH溶液噴雾在紙上显影。显色后顏色稳定,能遵守Beer氏定律,在每毫升含量为2—20微克內,光密度与溶液浓度成直綫关系。(五)提出了一个自DNP-結合物中测定DNP-基含量的分光光度方法。