METTL3介导EZH2 m6A修饰在结直肠癌5-氟尿嘧啶耐药中的作用机制研究

摘要 目的：探讨甲基转移酶样蛋白3（METTL3）在5-氟尿嘧啶耐药中的作用机制。方法：大剂量间歇诱导法建立5-FU耐药细胞株。在耐药组细胞中分别敲减METTL3及EZH2抑制GSK343处理。qPCR及Western blot检测METTL3和EZH2表达。CCK-8检测各组细胞增殖情况。m6A甲基化RNA免疫沉淀技术分析EZH2 mRNA m6A修饰修饰情况。结果：各药物浓度处理下的耐药组细胞增殖活性与未处理细胞无显著差异（P>0.05）而原代细胞组肠癌细胞较未处理细胞在0.5-10 μg/mL处理下细胞增殖活性显著减低（P<0.01）。耐药组细胞与原代细胞组相比,METTL3及EZH2表达水平显著升高（P<0.01）。耐药组细胞METTL3敲减后或GSK343处理后,在0.5 μg/mL-10 μg/mL浓度间下的细胞增殖活性与0 μg/mL处理细胞增殖活性相比显著减低（P<0.05）。耐药组细胞METTL3敲减细胞的EZH2表达与对照细胞比,显著下调（P<0.01）。m6A甲基化RNA免疫沉淀实验显示耐药组细胞METTL3敲减细胞的EZH2 mRNA m6A修饰水平（m6A富集度为6361.95±67.47%）,较未敲减细胞修饰水平（396.30±57.74）显著减低（P<0.01）。结论：METTL3在肠癌细胞5-FU耐药抵抗中起到关键作用,靶向抑制METTL3有望成为缓解肠癌耐药的重要分子靶点。     

印度谷螟突变体的诱导与培育

1991─1993年, 借助60 Co辐照及杂交技术,在国内外首次诱导和培育出印度谷螟(Plodia interpunctella Hubner)成虫的15种突变体。这些突变体是:翅透明型,半翅透明型,翅端部透明型,翅半月状透明斑型,前翅内半透明型, 后翅透明型,非对称透明型,深红眼型,淡红眼型,白眼型,胸腹板、足黄色型,深红眼翅透明型,淡红眼翅透明型,白眼翅透明型及眼翅腹三特征突变体。 Abstract:15 mutants of adults of Indian meal Moth,Plodia interpunctella Hubner,were obtained through 60Co γ-ray irradiation and hybridizations.These mutants are:transparent wings(tw),transparent semi-wings(tsw),transparent a thord outer region of wings(ttorw),semilunar transparent wings(stw),transparent base half of front wings(tbhfw),transparent hind wings(thw),non-parallel transparent wings(nptw),deep red eyes(dre),light red eyes(lre),white eyes(we),yellow feets and troracic sternum(yfts),deep red eyes and transparent wings(dre-tw),light red eyes and transparent wings(lre-tw),white eyes and transparent wings(we-tw),red eyes-transparent wings-transparent 5-6 th abdominal segments(re-tw-tas).     

虎斑游蛇染色体组型的研究

研究各种蛇的染色体数目、组型、带型及 其相互之间的关系,对于探讨蛇的分类及其演 化均有一定意义。关于蛇类染色体的研究自 Thatcher (1922）首先报道后,相继Nakamura (1927、1928、1929, 1935), Bhatnager（1960), Manroe(1962), Bergak(1963、1964、1965、1966, 1968, 1969), Itoh(1970), Bickham(1976）等对 游蛇科（Colubridae)、眼镜蛇科（Elapidae)、海 蛇科（Hydro户hdae),蜂科（Vipiridae）等科的部 分蛇类的染色都有所报道。但国内只近年有所 报道,研究不多[1,2,37。关于虎斑游蛇（Natrix tigrina lateralis (Berthold) ]染色体的研究未见 报道。为此我们对虎斑游蛇的染色体组型作了 研究和分析,现将研究方法与结果报道如下。 甲醇与冰醋酸（3:1)固定液固定30分钟。重复 固定3次,最后用空气干燥法制片。1:10的 Giemsa液（pH7.2 )染色30分钟。 染色体标本制成后,在油镜下计数100个 以上完整的、分散良好清晰的中期分裂相检查 二倍体染色体数目。再选取20个优良的中期 分裂相照相放大。参照Denve：体制测量方法, 进行染色体配对和组型分析。     

白蚁信息素研究进展

采用信息素防治白蚁这种世界性害虫是当前白蚁研究的一大热点。本文从化学和生物两个方面总结了几十年来国内外白蚁信息素及其类似物研究进展。讨论了影响信息素活性的几个因素。并根据最新的研究情况,对今后的信息素及其类似物的理论研究和应用情况进行了展望。     

纤维桩树脂核用于老年残根残冠修复的效果及对生活质量的影响

目的:探讨老年残根残冠应用纤维桩树脂核修复的临床效果及对病人生活质量的影响。方法:抽选我院行纤维桩树脂核修复的79例(86颗)老年残根残冠患者,对其进行3年随访,观察总体及不同牙位修复成功率和修复前、后生活质量的变化。结果:修复后进行3年随访,86颗残根残冠修复总成功率为95.3%,不同牙位修复成功率无显著差异(P0.05),均在94%以上,86颗牙失败4颗(其中2颗并发牙周炎、2颗牙纤维桩脱落,均未出现牙桩折断);修复后患者生活质量总分及各维度评分均明显优于修复前(P0.05)。结论:纤维桩树脂核是一种极为理想的残冠残根修复材料,能显著提高老年患者术后的生活质量,值得临床推广。     

高温对原代支持细胞增殖能力和occludin紧密连接蛋白的影响

目的:研究高温对原代大鼠睾丸支持细胞增殖作用和对紧密连接蛋白的损伤机制.方法:体外分离培养雄性Wistar大鼠睾丸支持细胞(Sertoli cell,SC),免疫组化FasL鉴定.实验分为对照组(36℃)和实验组(37℃、38℃、39℃).在相应的温度下培养5d后,CCK-8法检测SC增殖作用,Western印迹法检测OCLN表达水平.结果:体外培养SC的纯度＞90％,CCK-8结果显示,细胞增殖活性在36℃时最强,37～39℃时逐渐降低;Western印迹显示,36℃时OCLN表达量最高;高于36℃时,OCLN表达量随着温度的增加而降低(P＜0.05).结论:高温影响SC增殖活性,破坏了支持细胞紧密连接蛋白的正常表达和血睾屏障的完整性,从而影响正常精子的形成.     

骨髓基质干细胞移植改善慢性酒精中毒大鼠脑损害的相关机制研究

目的:探讨骨髓基质干细胞(bone marrow stormal cells, BMSCs)静脉移植对慢性酒精中毒大鼠脑保护作用的相关机制。方法:体外分离、培养、扩增SD大鼠BMSCs。成年雄性SD大鼠随机分为慢性酒精中毒组、BMSCs回输组、磷酸缓冲盐溶液(phosphate buffer saline,PBS)回输组和对照组,每组7只。前三组用酒精灌胃8周建立慢性酒精中毒动物模型,对照组不造模(给予蔗糖灌胃),BMSCs回输组和PBS回输组于造模7周时一次性经尾静脉回输BMSCs或PBS。免疫印迹法检测海马Bcl-2、Bax、NGF、BDNF以及信号转导分子p-Akt的表达;反转录PCR检测海马神经生长因子(nerve growth factor, NGF)和脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor, BDNF)。结果:BMSCs回输组海马抗凋亡蛋白Bcl-2表达高于其余三组(P0.05);促凋亡蛋白Bax表达低于慢性酒精中毒组(P0.01),与对照组无统计学差异(P=0.989)。BMSCs回输组鼠海马内NGF和BDNF m RNA和蛋白表达、p-Akt蛋白表达均高于其余三组(P0.05)。结论:静脉移植BMSCs能够明显改善慢性酒精中毒大鼠海马的细胞凋亡;其可能与自或旁分泌BDNF和NGF营养因子有关,且可能部分是通过激活PI3K/Akt通路实现。     

多因素复合制作气虚血瘀证脑缺血动物模型的实验研究

目的通过复制气虚血瘀证型大鼠脑缺血动物模型,探索病证结合动物模型制作方法.方法选用老年Wistar大鼠,采用饥饿、疲劳、寒湿、惊恐、高脂饮食等多因素复合方法复制气虚血瘀证动物模型,采用双侧颈总动脉结扎复制脑缺血动物模型.结果通过对一般体征和微观指标的观测,发现模型大鼠基本符合中医气虚血瘀证候特点和现代医学脑缺血病理变化规律.[HTH〗结论多因素复合作用可成功复制病证结合动物模型,本动物模型有可能成为将来中医药防治脑缺血科研工作的实验基础.     

干旱胁迫下氮素营养与根信号在气孔运动调控中的协同作用

干旱胁迫下根系与地上部分之间的信息传递可使植物叶片及时感知土壤水势变化, 从而使植物在没有真正受到干旱伤害时即可做出主动、快速的抗旱应答反应, 而在这一过程中, 脱落酸(abscisic acid, ABA)和pH起着关键的作用。本研究表明, 干旱胁迫下鸭趾草(Commelina communis L.)、番茄(Lycopersicon esculentum Mill.)和向日葵(Helianthus annuus L.)木质部汁液中pH的变化很不相同, 且该pH变化和木质部汁液中硝态氮离子浓度的变化没有直接的关系; 然而, 饲喂实验表明, 无论对于何种植物, 蒸腾流中硝态氮离子浓度的增加都可有效地增加气孔对ABA的敏感度; 分根实验进一步表明, 土壤中硝态氮营养的增加可明显提高气孔对根信号的敏感度。以上结果说明, 氮素营养可以和根信号相互作用共同操纵气孔运动。     

含荧光素酶基因的黑胸大蠊浓核病毒重组质粒的构建与表达

黑胸大蠊(Periplaneta fuliginosa)是我国分布最广的蟑螂种类.黑胸大蠊浓核病毒(Periplaneta fuliginosa densovirus, PfDNV)是我室1991年在国内首次报道并在国内外第一个分类鉴定的蟑螂细小病毒[1].我们构建了PfDNV全基因组克隆和酶切亚克隆重组质粒,测定并分析了病毒基因组全序列与结构.序列分析表明该病毒基因组具有细小病毒基因组的结构特征,其末端具有反转重复序列(Invert Terminal Repeatant, ITR)和回文结构,这类病毒基因组两端的特殊结构可能是与病毒复制,整合,拯救,包装有关的必需顺式元件[2～5].为了进一步研究黑胸大蠊浓核病毒基因复制及表达机理,尤其是其末端结构在病毒基因复制中的作用,我们将荧光素酶基因插入了PfDNV基因组保留了两个完整的末端结构而其它部分缺失的重组质粒中.将这种重组质粒转染虫体后,在虫体中检测到了荧光素酶的表达,说明在缺失基因组中间部分时,插入的外源基因依然可以复制、表达.本结果证实了PfDNV基因组的末端结构是PfDNV复制的必需结构.这一实验为将外源基因引入病毒基因组,构建基因工程杀虫剂提供了有效的技术途径.现将结果报告如下.