人外源性干扰素的研究——Ⅰ.人全血细胞干扰素诱生条件的研究

以新城鸡瘟病毒为诱生病毒,用制备冻干血浆剩余的血细胞试制干扰素。制备方法为全血细胞法,每200毫升血液的血细胞可制备200毫升粗制干扰素,效价大多数在每毫升1000—2000单位之间。用人肺纤维母细胞 SL?株为检定细胞,以滤泡性口腔炎病毒为被干扰病毒,建立了干扰素的检测系统,可较稳定地测定干扰素效价。并对制备干扰素的条件包括诱生病毒剂量,培养液成分以及加液量等进行了研究。     

基因工程人γ干扰素C端的结构分析及功能作用

基因工程人γ干扰素经溴化氰裂解后进行HPLC分析,发现C端肽缺失。毛细管电泳?及氨基酸序列定量分析结果进一步指出,其C端不仅缺失,而且不均一,分别以Lys—125,Lys-128和Lys-13O为末端。用wIsH／VSV系统测定其抗病毒效价,比活性为3x10⁷Iu／mg,说明其C端缺失13-18个氨基酸残基时并不影响活性。本文还讨论了C端断裂的可能原因。     

用国产单克隆抗体纯化重组干扰素α1b的研究

制备高纯度的重组干扰素α1b的关键技术是单克隆抗体亲和层析。我们过去用英国Celltech公司提供的抗干扰素α单克姓抗体珠进行纯化。为适应大规模生产的需要,我们用安科生物高科技公司所建的杂交瘤细胞分泌的干扰素单克隆抗体及其制备的抗体珠进行纯化,获得较好的结果,纯化IFNα1原液纯度（SDS－PAGE,HPLC,比活）,鼠IgG及单克姓抗体珠的吸附量,使用次数等均符合要求,并用于大规模生产。     

纯化的重组人α1型干扰素的某些理化性质

经SDS-PAGE银染色分析表明,重组人α1型干扰素基因在大肠杆菌中的表达产物rHuIFN-α1分子中含有巯基,易形成分子聚合体。等电聚焦电泳(IEF)的银染色结果揭示了其多种等电点的分子形式。双向电泳证明,每种等电点的rHuIFN-α1都可形成自身的聚合体。初步讨论了rHuIFN-α1的分子聚合体和多种等电点体的形成原因。     

大型除菌过滤器在重组干扰素生产中的应用

为适应大规模生产的需要,用Millipore293型滤器取代常用的赛氏滤器对重组干扰素α1b及γ进行除菌过滤,此种大型滤器不仅滤膜面积大,而且单位面积过滤量也有明显增加,因此,过滤速度显著加快,可适应大规模生产的应用,用此二种滤器作除菌过滤对干扰素活性无影响,过滤制品前用2%白蛋白预滤可减少滤膜吸附干扰素作用,Millipore和赛氏滤器除菌过滤后热原质均能达到肌肉注射标准,且大部分能达到静脉注射标准,有个别制品用赛氏滤器过滤后热原质达至不到静脉注射标准者,用Millipore滤器复滤后,可以合格,上述结果表明用Milli-pore293型滤器制备重组干扰素α1b及γ是切实可行的。