绵羊Myostatin基因启动子的功能分析

相比于Myostatin基因的作用机制而言, 对Myostatin基因转录和表达的调控机制了解很少. 为了更好地了解Myostatin基因5’调控区的结构和功能, 深入研究Myostatin基因的转录调控机制, 在最近的研究中克隆了绵羊Myostatin基因的启动子(Pro)序列(GenBank 登录号为AY918121). 进一步以EGFP为报告基因, 构建了各种长度的野生型MSTNPro^W-EGFP载体和E-box元件突变型MSTNPro^EM-EGFP载体, 通过转染C2C12小鼠骨骼肌成肌细胞系或绵羊成纤维细胞后, 对各种情况下EGFP的瞬时或稳定表达进行荧光定量分析而比较不同条件下绵羊Myostatin基因启动子的转录调控活性. 结果表明, 0.3~1.2 kb的绵羊Myostatin基因启动子都能不同程度地驱动EGFP在C2C12细胞中的转录和表达, 其中1.2 kb片段的转录调控活性最高. 然 而, 将绵羊1.2 kb MSTNPro^W-EGFP载体转染绵羊成纤维细胞后并未观察到EGFP的表达, 说明Myostatin基因表达的肌肉特异性源于启动子的转录特异性. 对稳定转染绵羊1.2 kb MSTNPro^W-EGFP载体的C2C12细胞进行荧光分析, 结果表明细胞生长密度的增加可以反馈性抑制Myostatin基因的转录和表达. 在C2C12分化状态下, 1.2 kb野生型绵羊Myostatin基因启动子的活性比成肌状态时显著升高, 而1.2 kb E(3+5+7)突变型Myostatin基因启动子的活性在C2C12分化前后并未表现出差别. 这一结果暗示肌肉调控因子MyoD可能是通过与E-box结合而引起Myostatin基因在C2C12分化和生长状态时转录和表达差异的一个原因.     

人类疱疹病毒7型糖蛋白gB、gH、gL、gO介导细胞融合

人类疱疹病毒 7 型(HHV-7)的感染依赖于包膜糖蛋白在病毒生命周期的多个阶段发挥功能. 这些蛋白质可以介导病毒吸附,病毒包膜和宿主细胞膜融合以及病毒在细胞间的接触传播. 将表达 HHV-7 糖蛋白的 293T 细胞与 HHV-7 易感的SupT1 细胞共培养,检测虫荧光素酶报告基因的表达,以鉴定介导膜融合的 HHV-7 糖蛋白. 研究发现,HHV-7 糖蛋白 gB、gH、gL、gO 能介导 293T 细胞与 SupT1 细胞的融合,且融合可被抗 CD4 单抗所抑制. 结果表明,糖蛋白 gB、gH、gL、gO对于 HHV-7 引发的膜融合是必需的,其中某个蛋白质或所形成的蛋白质复合物可能是 CD4 的配体.     

Nrf2/HO-1信号通路在人诱导性多能干细胞氧化应激中的作用

氧化应激是诱导性多能干细胞(induced pluripotent stem cell, iPSC)在培养和应用中遇到的一个关键问题,探讨其作用机制具有重要的理论和实践意义。目前有关iPSC氧化应激的研究相对较少,Nrf2/HO-1信号通路在其中的作用尚不明了。因此,本研究以不同浓度的H2O2(100、200、300、400 μmol/L)处理人iPSC(hiPSC),分别在4 h和24 h于倒置显微镜下观察hiPSC及其饲养层细胞SNL氧化损伤的程度,通过碱性磷酸酶（alkaline phosphatase, AP）试剂盒和超氧化物阴离子荧光探针,分别检测hiPSC多能性和细胞活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平,并通过qRT-PCR检测H2O2处理4 h后早期应激状态下Nrf2和HO 1 mRNA的表达水平,免疫细胞化学和Western印迹检测p-Nrf2和HO-1蛋白质的表达量。结果表明：hiPSC和SNL细胞的ROS水平呈H2O2剂量依赖性升高。除了100 μmol/L H2O2组hiPSC的细胞形态和多能性保持较好外,其余浓度H2O2均导致hiPSC出现不同程度损伤和死亡。但与SNL细胞相比,hiPSC中ROS水平相对较低,细胞状态也相对较好。SNL细胞中Nrf2和HO-1-mRNA表达的变化幅度与H2O2浓度呈线性相关,而hiPSC中Nrf2和HO-1表达的变化幅度与H2O2浓度之间并未呈现线性相关,其中Nrf2在100 μmol/L H2O2组表达量最高,而HO-1在200 μmol/L H2O2组表达量最高,意味着hiPSC氧化应激调控机制的复杂性。综上结果表明,hiPSC具有较好的抗氧化能力,其相关机制与Nrf2/HO-1信号通路有关,同时也可能涉及到其它相关通路的交互作用。     

益生菌联合早期肠内营养治疗重症急性胰腺炎临床疗效的Meta分析

目的系统性评价益生菌联合早期肠内营养对重症急性胰腺炎(sever acute pancreatitis,SAP)的临床疗效。方法计算机检索中国知网、万方数据库、维普期刊数据库、PubMed、Embase和The Cochrane Library,收集关于益生菌联合早期肠内营养治疗SAP的临床随机对照试验(randomized controlled trials,RCTs),按照纳入和排除标准筛选文献、提取资料,并对全部纳入的文献进行质量评价,采用Cochrane协作网提供的RevMan 5.3软件进行Meta分析。结果与对照组相比,研究组能够显著降低SAP患者的感染率(OR=0.23,95% CI:0.15~0.35,P<0.001)、病亡率(OR=0.21,95% CI:0.07~0.61,P=0.004)、血淀粉酶(WMD=-49.73,95% CI:-73.91~-25.55,P<0.001)、白细胞数量(WMD=-3.79,95% CI:-4.56~-3.02,P<0.001)、CRP含量(WMD=-33.59,95% CI:-48.31~-18.88,P<0.001),缩短腹痛消失时间(WMD=-12.83,95% CI:-14.73~-10.92,P<0.001)以及住院时间(WMD=-8.66,95% CI:-11.58~-5.75,P<0.001),增加患者血浆中白蛋白(WMD=5.84,95% CI:5.12~6.56,P<0.001)的含量。结论益生菌联合早期肠内营养能够显著降低SAP患者的感染率、病亡率、血淀粉酶、白细胞数量、CRP含量,缩短腹痛消失时间以及住院时间,并且还能增加患者血浆中白蛋白的含量。     

周期应变对动脉平滑肌细胞分泌血管紧张素II的影响

应用自行设计的硅胶膜伸张加载装置对培养于硅胶膜上的Ｗｉｓｔａｒ 大鼠主动脉平滑肌细胞施以周期性二维伸张应变（ 最大伸长比：纵向０ ．７ ％ ,横向０ ．３ ％ ） ,运用放射免疫沉淀法对其ＡｇＩＩ 的分泌量进行测定, 结果表明： 加载组血管紧张素ＩＩ 分泌量明显高于对照组（Ｐ＜ ０ ．００１ ,２ｈ ,１０ｈ 除外） ,对照组分泌曲线较平坦,而加载组曲线较尖锐;加载４ｈ ,ＡｇＩＩ分泌量达到峰值（２１９ ±２０ ．０ｐｇ／１０５ｃｅｌｌｓ） 。结合形态观察,表明力学信号能对主动脉平滑肌细胞的行为产生明显影响     

周期应变对动脉平滑肌细胞分泌血管紧张素II的影响

应用自行设计的硅胶膜伸张加载装置对培养硅胶膜上的Ｗｉｓｔａｒ大鼠主动脉平滑肌细胞施以周期性二维伸张应变,运用放射免疫沉淀法对其Ａｇ１１的分泌量进行测定,结果表明：加载组血管紧张素Ⅱ分泌量明显高于对照组,对照组分泌曲线较平坦,而加载组曲线较尖锐;加载４ｈ,ＡｇⅡ分泌量达到峰值。