重组TFPI缺失突变体TFPI1-161在毕赤酵母中的高效表达及功能鉴定

人组织因子途径抑制物 (TFPI)是一种体内天然存在的外源性凝血途径特异性抑制物。缺失突变体TFPI_1-161仅包括TFPI的N末端、K1和K2结构域 ,是一种研究TFPI结构与功能及其相互关系的理想对照分子。以克隆质粒Pgem 3Zf(-) TFPI为模板 ,用PCR方法获得TFPI_1-161 基因 ,构建表达质粒Ppic9k TFPI_1-161并转化毕赤酵母GS115。通过筛选多拷贝转化子及优化发酵培养条件 ,首次在毕赤酵母中高效表达了TFPI_1-161,经纯化后最终产量高于酿酒酵母 20倍以上。由于糖基化程度不同 ,TFPI_1-161 表达为TFPI1_1-161 (2 4kD)和TFPI_1-161 (27kD)两种分子形式 ,其等电点分别为 4.8和 4.9。根据等电点差异 ,二者可通过阴离子交换层析得到分离 ,其活性无显著性差异。经分子筛和阴离子交换层析分离纯化后 ,从 4L发酵培养液中可分别获得 1.4gTFPI_1-161(2.4kD)和1.8gTFPI_1-161 (2.7kD) ,其比活性分别达12880u/mg和12400u/mg.回收率达55%.经稀释的凝血酶原时间及发色底物法检测,重组FTPI_1-161具有良好的抗凝及抑制Fxa活性的作用。为获得大量TFPI_1-161提供了一种廉价高效的的蛋白表达纯化方式。为进一步的基础及临床前研究奠定了基础。     

重组TFPI缺失突变体TFPI1-161在毕赤酵母中的高效表达及功能鉴定

人组织因子途径抑制物(TFPI)是一种体内天然存在的外源性凝血途径特异性抑制物。缺失突变体TFPI1-161包括TFPI的N末端、K1和K2结构域,是一种研究TFPi结构与功能及其相互关系的理想对照分子。以克隆质粒pGEM-3Zf(-)-TFPi为模板,用PCR方法获得TFPI1-161基因,构建表达质粒pPIC9K-TFPi1-161并转化毕赤酵母GS115。通过筛选多拷贝转化子及优化发酵培养条件,首次在毕赤酵母中高效表达了TFPI1-161经纯化后最终产量高于酿酒酵母20倍以上。由于糖基化程度不同,TFPI1-161表达为TFPI1-161(24kD)和TFPI1-161(27kD)两种分子形式,其等电点分别为4、8和4．9。根据等电点差异,二可通过阴离子交换层析得到分离,其活性无显性差异。经分子筛和阴离子交换层析分离纯化后,从4L发酵培养液中可分别获得1.4g TFPI1-161(24kD)和1.8gTFPI1-161(27kD),其比活性分别达12880u／mg和12400u／mg,回收率达55％。经稀释的凝血酶原时间及发色底物法检测,重组TFPI1-161具有良好的抗凝及抑制FXa活性的作用。为获得大量TFPI1-161提供了一种廉价高效的蛋白表达纯化方式,为进一步的基础及临床前研究奠定了基础。     

肠道上皮LncRNA在肠道菌群与痛风间的桥梁作用

痛风作为一种代谢性疾病,其病因主要为嘌呤核苷酸代谢紊乱及尿酸排泄障碍,临床表现主要是高尿酸血症以及不定期发作的急性关节疼痛,而单钠尿酸结晶沉积引起炎症反应是急性关节疼痛的关键环节。长链非编码RNA(long-chain non-coding RNA,LncRNA)是一类不编码蛋白质的调控RNA,其在单钠尿酸结晶沉积引起的炎症反应中起着主要调控作用。近年来,随着肠道菌群概念的提出,众多学者发现肠道菌群在痛风的发生发展中发挥着主要的调控作用。正常人与高尿酸血症患者在肠道上皮LncRNA种类和数量上存在显著差异。在临床工作中,调节肠道菌群对控制血尿酸水平具有重要意义,因此推测通过调节肠道菌群从而调控肠道上皮LncRNA可能是一种控制血尿酸水平的有效方法,检测LncRNA的种类及数量可能成为一种诊断痛风及高尿酸血症的新方法。本文就痛风与LncRNA的关系、肠道菌群对高尿酸血症的影响、肠道黏膜屏障与LncRNA三个方面展开综述,揭示肠道上皮LncRNA在肠道菌群与痛风间的桥梁作用,为诊断痛风与控制血尿酸提供新的思路。