假单胞菌Pseudomonas fluorescens Pf0-1中转录调控因子SpfB负调控DNA磷硫酰化修饰

[目的]DNA磷硫酰化修饰是DNA骨架上非桥接的氧原子以序列选择性和R-构型被硫取代的一种新型DNA修饰。目前,磷硫酰化修饰在多种细菌、古生菌以及人类致病菌中多有发现,但其分子调控机制尚不清楚。为了全面解析磷硫酰化修饰的调控机制,本文选择荧光假单胞菌Pf0-1为研究对象,开展了其DNA磷硫酰化修饰的调控机制研究。[方法]首先,构建了spfB基因缺失和回补菌株,使用碘能特异性断裂磷硫酰化修饰DNA的方法,研究了该基因缺失对修饰表型的影响。利用cDNA在相邻同方向的基因间隔区进行PCR,确定了磷硫酰化修饰基因簇spfBCDE内的共转录单元。通过荧光定量RT-PCR,分析了spfB基因缺失突变株中磷硫酰化修饰基因的转录量。利用异源表达并纯化得到的重组蛋白SpfB进行了体外功能研究。通过EMSA实验,验证了SpfB蛋白具有与spfB启动子序列结合活性。通过DNase I footprinting实验,精确定位了SpfB蛋白与DNA结合序列。[结果]spfB基因的缺失加剧了磷硫酰化修饰DNA断裂所致电泳条带弥散的表型,spfB基因的回补能够恢复该表型,证明spfB基因负调控磷硫酰化修饰。鉴定了spf基因簇中只含有1个共转录单元,且该共转录单元在△spfB突变株中转录水平明显上升。通过EMSA和DNase I footprint实验,检测了SpfB蛋白与磷硫酰化修饰基因spfBCDE的启动子区域5''-TGTTTGT-3''相结合。[结论]SpfB作为转录调控因子负调控磷硫酰化修饰基因spfBCDE的表达,为解析磷硫酰化修饰的调控机制和全面理解基因组上的部分修饰特征奠定了基础。     

Identification of tumor metastasisrelated gene TMSG-1 by mRNA differential display

To investigate genes involved in cancer metastasis, mRNA differential display was used to compare the levels of gene expression of two cancer sublines derived from prostate carcinoma cell PC-3M that had different metastatic potentials. The differentially expressed genes were confirmed by Northern blot, and sequenced. The full-length cDNA of a tumor metastasis suppressor gene (TMSG-1) was obtained by using EST assembling and verified by RT-PCR and sequencing. The results showed that expression levels of TMSG-1 were lower in the highly metastatic cell line 1E8, compared with the non-metastatic cell line 2B4. The difference was significant. Full-length cDNA of TMSG-1 was about 2 kb, containing an open reading frame that encoded a protein of 230 amino acids. GenBank Blastn showed no marked homology with known genes. The functional prediction of amino acids sequence encoded by TMSG-1 gene indicated TMSG-1 protein was transmembrane protein, with 3 transmembrane domains, 3 putative protein kinase phosphorylatio     

酶法合成氨基酸进展Ⅰ 由固定化酶或细胞合成天门冬氨酸

<正> 一、引言天门冬氨酸(Asp)虽非必须氨基酸,但是动物体合成蛋白质所需氨基酸之一,因此,多年来一直作为食品添加剂、调味品和药剂等被广泛使用。近年来由于天门冬素二肽糖(L-Asp-L-phe甲酯)的迅速发展,促使天门冬氨酸和苯丙氨酸成为氨基酸中发展最快的品种。1985年世界天冬氨酸年产量     

苏州河浮游植物群落恢复的生境条件研究

于2005年4月至2006年5月期间对苏州河浮游植物群落及理化因子进行研究,分析了苏州河浮游植物现状及水质现状,并分析两者之间的关系,得出水温、总磷、总氮、COD_cr等理化因子对浮游植物群落有显著影响,且其影响均存在临界值,分别为水温15℃、总磷0.6mg·L^-1、总氮10mg·L^-1、COD_cr20mg·L^-1.即在苏州河的浮游植物群落恢复中,当理化因子小于其相对浮游植物群落的临界值时,小球藻的出现频率低、密度百分比低,梅尼小环藻出现频率高、密度百分比高;而当理化因子大于其相对浮游植物群落的临界值时,小球藻的出现频率高,密度百分比高,梅尼小环藻出现频率低,密度百分比低.因此在对苏州河进行生态恢复时,应考虑到各理化因子对浮游植物影响的临界值,综合权衡各方面因素,确定水质恢复应达到的目标.     

螺类与着生藻类的相互作用及其对沉水植物的影响

浅水湖泊的富营养化常导致水生植被的退化与浮游藻类的爆发［１０,１８,２９］。可利用光通常是决定沉水植物分布、生物量和生产力的最重要因子,因此,伴随高营养负荷的浮游藻类繁殖,极大地削弱了沉水植物的光合能力［２０］。然而,Ｐｈｉｌｉｐｓ等人［２８］认为,...     

非水介质中辣根过氧化物酶（HRP）荧光活性测定法

建立了一种分析ＨＲＰ催化活力的新方法。该方法基于单体（底物）、聚合物（产物）的荧光发射光谱不重叠,使用荧光光谱仪,通过测量底物荧光淬灭来检测ＨＲＰ在非水介质中（二氧六环－水、乙醇－水、丙酮－水体系）催化酚类、芳香胺类物质聚合的活力。此方法迅速、简便,结果是定量并可重复的,并能定量地计算底物转化率。     

浙江天童常绿阔叶林演替过程凋落物数量及分解动态

浙江天童常绿阔叶林演替过程森林凋落物量呈增长趋势,其中：乔木叶比例最大,其它器官组分在不同演替阶段的比例不一致,灌木叶和草本、树皮比例随着演替进程而呈减少趋势,树枝和繁殖器官则呈增大趋势。以分解袋法测得凋落物年失重率和指数方程模拟的分解系数Ｋ在演替过程中均呈增长趋势,这与年凋落物数量变化趋势相似。可见,随着演替进程,生物循环加快,群落自肥能力增强。     

上海公园水体夏季浮游植物群落与环境因子的关系

为了解公园水体浮游植物群落状况,分析浮游植物物种分布和环境因子之间的关系,揭示浮游植物物种对生态环境的需求,于2008年7月和9月对上海市11个公园水体浮游植物群落进行了调查,对获得的浮游植物数据和环境因子数据进行典范相关分析(CCA),并绘制了物种与环境因子关系的二维排序图。结果表明：调查期间共鉴定出浮游植物384种,隶属于8门,浮游植物密度范围为2.01×10⁵～57.60×10⁵ cells·L^-1;群落组成以蓝藻、裸藻、硅藻和绿藻为主,主要优势种有细微颤藻、无常蓝纤维藻、尾裸藻、颗粒直链藻、梅尼小环藻、普通小球藻、四尾栅藻等;7月影响浮游植物分布的主要环境因子依次为铵态氮、溶解氧、水温和总磷,而9月的pH值、水温、溶解氧、透明度和总氮含量对浮游植物的分布产生影响较大;其中,透明度和浮游动物量是影响隐藻、甲藻和硅藻藻类生物量的主要环境因子,而蓝藻、裸藻、绿藻主要受水体氮磷营养盐浓度和溶解氧的影响。     

乌龟胚胎发育过程中钙,镁代谢的研究

本文对乌龟胚胎发育过程中钙,镁代谢特征进行了研究。结果表明：卵壳为乌龟胚胎发育提供５４．０７％的钙,１２．２６％的镁：其余的４５．９３％钙,８７．７４％的镁由 卵内容物（卵黄＋卵清）提供。