我国禽流感研究进展及成就

禽流感不仅严重危害养禽业,而且给公共卫生造成巨大威胁。为了科学认识和积极防控禽流感,我国科学家进行了大量且富有成效的研究,取得了举世瞩目的成果。通过长期的监测,基本掌握了禽流感在我国的流行情况和进化规律;利用反向遗传操作技术和蛋白质组学技术,发现了影响流感病毒致病力、传播力和受体结合能力的部分关键位点,阐释了其作用机制;通过对传统技术的改进和先进方法的应用,不断成功建立禽流感诊断、检测技术;新型禽流感疫苗不断涌现并逐步被推广和应用,取得了良好的免疫效果。上述成果为我国禽流感的防控奠定了良好的基础,也为后续研究提供了依据。但是禽流感的防控形势依然严峻,2013年新型H7N9病毒的出现,使禽流感的防控面临新的挑战。     

新城疫强毒株荧光定量RT-PCR检测技术的建立及应用

基于国内流行的新城疫病毒强毒株F蛋白裂解位点分子特征设计特异性引物及Taqman探针,建立了一种可检测新城疫强毒株的一步法实时荧光定量RT-PCR方法。通过体外转录法制备cRNA标准品作为阳性模板制作标准曲线以及临床样品的检测绘制出ROC曲线,对诊断指标进行系统评价。结果显示:该方法的标准曲线为Y=-3.390X+38.23,相关系数R~2为0.9999;灵敏度试验显示,该方法的最低检测限为2拷贝/μL,比常规RTPCR高10倍;特异性试验显示该方法与常见禽病病毒无交叉反应;重复性试验的组内和组间的变异系数分别低于1%和1.5%。通过检测1 974份临床样品绘制ROC曲线显示,ROC曲线下面积为0.9861,当Youden Index为93.12时,cutoff值设为35,诊断的敏感性和特异性分别为94.82%、98.3%,与病毒分离方法的Kappa系数为0.919。本研究建立的方法敏感性高、特异性强、重复性好、诊断准确性极好,给实验室提供一种快速、实用的检测临床样品的方法。     

带有穿膜肽重组PTD-KLF4的制备及活性鉴定

KLF4是Kruppel样转录因子(kruppel-like factors, KLF)家族中的一员,是维持胚胎干细胞(embryonic stem cells, ESCs)全能性的重要转录因子。蛋白质转导结构域(protein transd uction domain, PTD)能够携带大分子进入细胞。为了获得具有穿膜功能的重组KLF4蛋白,利用原核表达载体PKYB表达KLF4与PTD的融合蛋白PTD-KLF4,用Ni柱纯化融合蛋白并作Western blotting鉴定。利用异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate, FITC)标记PTD-KLF4检测其穿越中国仓鼠卵巢(chinese hamster ovary, CHO)细胞细胞膜的能力;用荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer, FRET)检测重组融合蛋白PTD-KLF4结合目的DNA的活性。结果表明:重组PTD-KLF4可以成功进入细胞、定位细胞核内,穿膜效率为(22.29±2.1)%。重组融合蛋白PTD-KLF4引起细胞形态变化,并具有与目标DNA序列特异结合的能力。重组PTD-KLF4的制备为外源蛋白诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells, IPSCs)奠定基础。     

重组PAC1-EC1(N)对表达不同PAC1变体的细胞系细胞活性的影响

垂体腺苷酸环化酶激活多肽(pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide,PACAP)特异受体PAC1(normal型)N端胞外域[简称PAC1-EC1(N)]具有调控PAC1活性的作用.为研究PAC1-EC1(N)对表达不同PAC1变体的细胞系活性的影响,利用基因...     

血清Alb、Mb及MEWS、Waterlow评分对重症监护病房患者压力性损伤的预测价值

摘要 目的：探讨血清白蛋白（Alb）、肌红蛋白（Mb）及改良早期预警评分（MEWS）、Waterlow评分对重症监护病房（ICU）患者压力性损伤（PI）的预测价值。方法：选取2021年6月～2022年12月在新疆维吾尔自治区人民医院ICU住院的患者120例,根据是否发生PI分为PI组43例和非PI组77例。ICU患者PI的影响因素采用多因素Logistic回归分析,血清Alb、Mb及MEWS、Waterlow评分对ICU患者PI的预测价值采用受试者工作特征（ROC）曲线分析。结果：PI组年龄大于非PI组,机械通气比例、体温、Mb、MEWS、Waterlow评分高于非PI组,住院时间长于非PI组,Alb低于非PI组（P＜0.05）。住院时间延长和Mb升高、MEWS增加、Waterlow评分增加为ICU患者PI的独立危险因素,Alb升高为其独立保护因素（P＜0.05）。血清Alb、Mb及MEWS、Waterlow评分四项联合预测ICU患者PI的曲线下面积大于各指标预测（P＜0.05）。结论：血清Alb水平降低和Mb、MEWS、Waterlow评分升高与ICU患者PI发生独立相关,血清Alb、Mb及MEWS、Waterlow评分联合对ICU患者PI具有良好预测价值。     

带有穿膜肽重组PTD-Sox2的制备及活性鉴定

目的:制备带有穿膜肽的重组蛋白PTD-Sox2并对其活性进行鉴定.方法:通过将Sox2基因与穿膜肽基因PTD融合,利用原核表达载体pKYB进行表达,用Ni柱制备、纯化融合蛋白;用Western blot对其进行鉴定;用FITC标记PTD-Sox2,与CHO细胞孵育,检测其穿膜能力;用FRET法检测转录因子Sox2结合目的DNA的活性.结果:构建了带有穿膜肽重组PTD-Sox2的原核表达菌,制备并纯化PTD-Sox2,对其活性鉴定.结论:PTD-Sox2能够穿过细胞膜与核膜,进入细胞核内,穿膜效率为40.86%,并且可与目的DNA进行特异结合,为蛋白体外诱导iPS的产生奠定基础.     

低温冷害对龙眼成花的影响及抹除荔枝和芒果冷害花穗促进腋芽再生花穗的效果

为探讨早春极端低温对龙眼成花的影响及芒果和荔枝花穗冷害发生时应对措施的效果,在2008年早春低温冷害时,通过抹除芒果和荔枝的冷害顶生花穗,研究该应对措施对促进腋芽再分化花芽并抽生花序的效果,并在低温冷害后,对不同龙眼品种的成花情况进行调查。结果表明:抹除荔枝冷害顶生花穗后能显著促进黑叶、钦州红荔、糯米糍、立夏红腋芽再生花序,平均单株花穗数分别为139、62.5、28和29穗,分别比对照的高119、22.5、25和26穗;而妃子笑、三月红、桂味和禾荔的处理树和对照树之间差异不明显。抹除芒果冷害顶生花穗后,台农1号、贵妃、桂热82号、红象牙和金穗芒的平均单株成花数分别为92、18、131、20.5和18穗,明显高于对照;而凯特芒、桂热120、吉尔、紫花芒和金穗芒处理树和对照树之间差异不显著。龙眼低温冷害后成花较好的有桂明、储良、石硖、小广眼、大乌圆和大广眼,平均单株花穗数分别为88、67、52.7、52、51和50穗;其次是桂香、乌龙岭、东壁、立冬本和早白露,平均单株花穗数分别为39、26、25、23.5和21.5穗。     

利用焦磷酸测序技术检测H7N9禽流感病毒NA基因分子标签

本研究旨在建立H7N9亚型禽流感病毒NA基因分子标签的焦磷酸测序检测方法,用于H7N9型禽流感病毒的快速检测和鉴定。通过对公开发表的H7N9亚型禽流感病毒NA基因序列进行比对,发现分离株在NA基因特定区域缺失的15个核苷酸可作为H7N9亚型禽流感病毒NA基因特异性的分子标签。通过设计覆盖此区域的特异性扩增引物和测序引物,建立了H7N9型禽流感病毒NA基因焦磷酸测序检测方法。基于NA基因特定缺失区域建立的焦磷酸测序技术能用于H7N9亚型禽流感病毒国内分离株NA基因的快速检测和鉴定,且具有较好的特异性和重复性。通过对3株H7N9亚型禽流感病毒分离株的检测,表明3株H7N9亚型禽流感病毒的NA基因均存在15个核苷酸缺失的分子标签。本研究建立的H7N9亚型禽流感病毒NA焦磷酸测序检测方法,可用于H7N9禽流感病毒的检测和鉴定。