基于NF-κB荧光蛋白报告基因抗肿瘤药物筛选平台的建立

采用基因工程技术构建绿色荧光蛋白（GFP）报告基因质粒,有利于活细胞成像、蛋白质印迹（WB）、细胞流式分析及活细胞示踪等,从而对抗肿瘤药物进行筛选。利用聚合酶链反应（PCR）扩增NF-κB基因的启动子序列以及GFP基因片段,将其克隆到pGL6-Enhancer载体中,通过菌落PCR检测、酶切鉴定和测序证明了质粒构建成功。然后,将构建的质粒转染到HEK-293T细胞中,根据活细胞荧光成像、WB及流式细胞分析验证,构建的报告基因质粒在细胞内可正常表达。选择抗肿瘤药物雷帕霉素、紫杉醇、吉西他滨,以及本实验室正在研究开发的多肽类抗肿瘤药物M1-20、M1-21验证报告基因体系试验,发现构建的报告基因质粒可以响应药物对细胞的影响。该药物筛选平台的建立为研究抗肿瘤药物对供试细胞的影响提供了良好的试验技术体系,同时,也为构建活细胞示踪体系提供了材料。     

抗寒剂CR－4提高玉米幼苗抗寒力及质膜5＇－核苷酸酶冷稳定性的研究

抗寒剂ＣＲ－４提高玉米幼苗抗寒力及质膜５＇－核苷酸酶冷稳定性的研究孙龙华,简令成,王瑞萍（中国科学院植物研究所,北京１０００４４）ＳＴＵＤＩＥＳＯＦＣＯＬＤ－ＲＥＳＩＳＴＥＲＣＲ－４ＦＯＲＩＮＣＲＥＡＳＩＮＧＣＯＬＤＨＡＲＤＩＮＥＳＳＡＮＤＳＴＡＢＩ...     

微囊藻毒素转运酶MlrD结构及生物学特性分析

微囊藻毒素(Microcystins,MCs)是一类由有毒蓝藻产生的具有肝毒性的环状七肽,生物降解能有效且持续的去除MCs,其中Mlr 降解途径在 MCs 的生物降解过程中发挥了重要作用。转运酶MlrD被认为负责MCs及其降解产物的转运,但对于MlrD功能及其结构的研究依然缺乏。该文分析了MlrD的保守性并构建了其三级结构。结果表明,MlrD在MCs降解菌之间高度保守, MlrD二级结构由α-螺旋和无规则卷曲组成。进一步分析其活性位点为位于第2和3跨膜螺旋连接处的Gly69、Ala73、Asp74、Gly78、Arg79、Ala82、Ile83以及位于第5跨膜螺旋上的Phe142、Tyr143、Ala146、Val147、Gly150,可以通过突变或敲除活性位点研究其功能。该文为进一步研究MlrD的结构功能提供了理论基础,有助于深入了解MCs的转运及代谢机制。