阴沟肠杆菌(nifL－Ac)工程菌株的构建

采用基因定位突变的方法,在体外把来自ｐＢＲ３２２ 的四环素抗性（Ｔｃｒ） 基因片段插入由ｐＳＴ１１４２ 质粒所携带的阴沟肠杆菌ｎｉｆＬ基因３’端的Ｓｍａ Ⅰ位点,再经细胞体内同源基因片段的重组交换,选择获得了在染色体上ｎｉｆＬ突变的阴沟肠杆菌Ｅ１２ 和Ｅ１３ ,两者Ｔｃｒ 基因插入ｎｉｆＬ的转录方向相反。经分析显示,Ｅ１３（ ｎｉｆＬ－ ） 由于Ｔｃｒ 基因插入后,在ｎｉｆＡ上游产生具有启动子功能的核苷酸序列（ＴＴＴＣＡＴＡ） ,激活ｎｉｆＡ 的表达。当Ｅ１３ 和Ｅ１２ 被引入多拷贝组成型ｎｉｆＡ 质粒ｐＢＦ１０１后,在有氨条件下ｎｉｆ 基因去阻遏表达,呈高的固氮酶活力,与野生型Ｅ２６（ｐＢＦ１０１） 比较,其比活力提高近１ 倍     

阴沟肠杆菌Tn5—nifA重组质粒的构建及其nifA的表达分析

构建的生组质粒ＰＢＦ１０１带有阴沟肠植菌Ｅ２６固氮基因ｎｉｆＡ片段,该质粒具有广泛宿主范围接合转移特性和转座子Ｔｎ５的转座作用。验证了Ｅ２６ｎｉｆＡ产物能激活肺炎克氏杆菌ｎｉｆＨ启动子的表达。解除氨对固氮酶合成的阻遏作用。发现当ＰＨＦ１０１引入自生固氮催娩克氏杆菌ＮＧ１３后,可观罕到固氮酶的组成型生成,同时在３９℃高温条件下的细菌仍能检测到部分固氮活性。     

农用抗菌素402的研究 Ⅱ.分离、提纯和理化性质

直丝淡紫灰链霉菌(Streptomyces lavendulorectus)“402”产生的农用抗菌素“402”(以下简称“402”),不论在离体或整体条件下对麦类赤霉病都有抑制作用。本文报道“402”的分离、提纯和理化性质的研究结果。     

阴沟肠杆菌（nifL—A^c）工程菌株的构建

采用基因定位突变的方法,在体外把来自ｐＢＲ３２２的四环素抗性基因片段插入由ｐＳＴ１１４２质粒所携带的阴沟肠杆菌ｎｉｆＬ基因３－端的ＳｍａⅠ位点、再经细胞体内同源基因片段的重组交换,选择获得了在染色体上ｎｉｆＬ突变的阴不直菌Ｅ１２和Ｅ１３,两者Ｔｃ＾ｒ基因插入ｎｉｆＬ的转录方向相反。经分析显示,Ｅ１３（ｎｉｆＬ）由于Ｔｃ＾ｒ基因插入后,在ｎｉｆＡ上 生具有启动子核苷酸序列（－ＴＴＴＣＡＴＡ－）,激活     

阴沟肠杆菌nifL对nifA蛋白激活固氮基因表达的影响

通过基因定位突变的方法 ,构建了阴沟肠杆菌E2 6染色体上基因nifL突变菌E11和E12 ,并对其固氮特性进行分析。结果显示 ,当细菌在有NH 4 的条件下 ,nifL作为固氮基因的负调节因子 ,可能是通过nifL蛋白与nifA蛋白之间的相互作用 ,形成某种复合物 ,导致NifA的失活 ,从而关闭nif基因的表达。高温条件下 (37℃ ) ,nifL并不参与对nif基因表达的阻遏作用 ,但是nifL的突变影响NifA激活nif基因表达对热的稳定性     

阴沟肠杆菌nirL对nirA蛋白激活固氮基因表达的影响

通过基因定位突变的方法,构建色肠杆菌Ｅ２６染色体上基因ｎｉｒＬ突变菌Ｅ１１和Ｅ１２,并对其固氮特性进行分析。结果显示,当细菌在有ＮＡ＾＋４的条件下,ｎｉｒＬ作为固氮基因的负调节因子,可能是通过ｎｉｆＬ蛋白与ｎｉｆＡ蛋白之间的相互作用。形成某种复合物,导致ＮｉｒＡ的失活,从而关闭ｎｉｆ基因的表达。高温条件下（３７℃）,ｎｉｒＬ并不参与对ｎｉｆ基因表达的阻遏作用,但是ｎｉｆＬ的突变影响ＮｉｆＡ激活ｎｉ     

阴沟肠杆菌基因nifA经转座子Tn5整入催娩克氏杆菌NG13的基因组

根际固氮细菌与禾谷类作物如水稻、小麦、玉米等进行联合固氮,能使作物有不同程度的增产（APp等1980,Watanable和hn1984）。水稻是世界上主要粮食作物之一,因此,研究增强水稻根际细菌的联合固氮作用,吸引着科学家们的兴趣。催娩克氏杆菌（KMFithemp）NG13与水稻能进行有效的联合固氮（Yoo等1986）。但是在有氨的生长条件下,细菌的固氮活力受到阻遏。ZhU等将带有nifA的重组质粒引进阴沟肠杆菌EZ6后,观察到有氨存在条件下固氮酶组成型生成。我们实验室构建了具有广泛接合转移特性的阴沟肠杆菌Tns－nifA嵌合质粒PBF101,基因nif…     

阴沟肠杆菌Tn5－nifA重组质粒的构建及其nifA的表达分析

构建的重组质粒ＰＢＦ１０１带有阴沟肠杆菌（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｃｌｏａｃａｅ）Ｅ２６固氮基因ｎｉｆＡ片段,该质粒具有广泛宿主范围接合转移特性和转座子Ｔｎ５的转座作用。验证了Ｅ２６ｎｉｆＡ产物能激活肺炎克氏杆菌（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ｎｉｆＨ启动子的表达,解除氨对固氮酶合成的阻遏作用。发现当ＰＢＦ１０１引入自生固氮催娩克氏杆菌（Ｋ．ｏｘｙｔｏｃａ）ＮＧ１３后,可观察到固氮酶的组成型生成,同时在３９℃高温条件下的细菌仍能检测到部分固氮活性。