浙江蝮蛇毒中三种磷脂酶A_2的比较

从浙江蝮蛇毒中纯化了三种磷脂酶A_2。前文已报道了其中二种——中性磷脂酶A_2,即蝮蛇毒素(Agkistrodotoxin)和碱性磷脂酶A_2——的纯化及性质的研究。本文报道的是第三种,即酸性磷脂酶A_2的纯化方法,比较了这三种磷脂酶A_2的特性,包括分子量、氨基酸组成、N末端、等电点、热稳定性、酶活性、毒性和溶血活性等。结果表明,它们有相似的分子量和热稳定性,但在其他方面却有显著的差别。在酶活性方面,酸性酶活性最高,碱性酶活性最低;对小白鼠的致死毒性,中性酶最高,碱性酶较低,而酸性酶几乎不表现毒性;对大白鼠红细胞的溶血现象,碱性酶最强,中性酶次之,酸性酶几乎不溶血。因此推测磷脂酶A_2的溶血效应与磷脂酶A_2分子的电荷有关。     

国产聚酰胺薄膜在生化分析中的应用

聚酰胺薄膜是利用聚酰胺作为涂料固定在载片(涤纶片)上,制成质地均匀含有紧密多孔的薄膜。它是一种新的薄层层析材料。由于它具有分辨力强、灵敏度高、分析速度快、操作方便等优点,今天已广泛应用于各种化合物的分析。国内过去聚酰胺薄膜都由各实验室自己制备,由于受条件限制,质量不能保证,浪费很大,因而无法大量推广。最近,上海生化所与浙江黄岩化学实验厂协作,试制了聚酰胺薄膜,质量较好,能成批生产,从而为此种薄膜在各分析领域中的广泛应用提供了有利条件。前文已报道了聚酰胺薄膜的层析原理及其在蛋白质化学分析中的应用。本文介绍用上述国产聚酰胺薄膜对生化中常用的氨基酸、核     

我国蝮属蛇毒的聚丙烯酰胺凝胶电泳比较——兼论蛇毒电泳在毒蛇分类上的应用价值

蛙科、蝮亚科、蝮属Agkistrodon(sensu stricto)已知约12种,基本上分布于古北界。我国已知产6种,个别种的分布可向南跨及东洋界的华中区。我国产种类中,intermcdius曾作为halys的亚种;blomhoffii亦曾作为halys的亚种,因而原订Agkistrodon blomhoffiibrevicaudus Stejneger 1907与Agkistrodon blomhoffii ussuriensis Emelianov 1929就曾相应改隶为Agkistrodon halys(Pallas)1776的亚种。近年来,有主张将intermedius恢复为种级(赵尔宓,1978;Gloyd,1978),赵尔宓等在讨论我国蝮蛇的种下分类时,亦提出     

蝮蛇突触前神经毒素的纯化及其生化性质的进一步研究

本文在前文的基础上,改进了蝮蛇神经毒素的分离方法,纯化了蝮蛇毒中的两个神经毒素之一,突触前神经毒素Agkistrodotoxin(简写为ATX),并对其生化特性进行了分析。应用DEAE-纤维素柱层析、CM-葡聚糖凝胶柱层析和聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳等方法分离纯化,得到一个均一的神经毒素蛋白,经聚丙烯酰胺凝胶在pH 碱性和pH 酸性电泳鉴定,都呈现一条区带。氨基酸定量分析结果表明,此神经毒素由121个氨基酸组成,由此计算出的分子量为13,700,与用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测得值接近。N 末端是门冬酰胺,C 末端是丝氨酸。纯化后的神经毒素显示磷脂酶A 活性,比活相当于粗毒的11倍。     

蝮蛇突触前毒素的结晶及其物化性质的鉴定

江苏和浙江省一带所产的蝮蛇(Agkistrodon halys Pallas)毒,按前文所描述方法,分离出二个主要神经毒组分。经生理学鉴定其中一个具有选择性地阻断神经肌肉接头突触前传递过程的作用。用等电聚焦板电泳从该组分制备出经聚丙烯酰胺圆盘电泳鉴定为一均一条纹的突触前毒素,定名为蝮蛇神经毒素(agkistrodotoxin),蝮蛇神经毒素对小白鼠(腹腔注射)的最小致死量为每公斤体重55微克,在90℃下保温20分钟毒性不变,用中性连续或碱性不连续SDS 圆盘电泳测定的分子量为13,400,不含亚基,用等电聚焦圆盘电泳测得等电点为6.9,在12℃对34%饱和硫酸铵(pH7.0)透析可得长方形晶体。关于蝮蛇神经毒素的其他生理特性,以及蝮蛇毒中其他神经毒素的纯化和鉴定将在另文发表。     

浙江蝮蛇毒磷脂酶A抗凝作用的研究

本文研究分析了从浙江产蝮蛇毒提纯的三种磷脂酶A(PLA)的抗凝活性,结果只有碱性PLA具有抗凝作用,而酸性PLA与中性PLA(Agkistrodotoxin)均无此作用。碱性PLA能显著延长血浆复钙时间和凝血酶原时间,影响血液凝血活酶的生成,抑制血小板磷脂与红细胞磷脂的促凝活性,但对凝血酶时间及纤维蛋白平板溶解试验无影响。这些结果表明,碱性PLA可能通过对膜磷脂的作用而干扰凝血酶原酶的形成。碱性PLA明显改变了血小板和红细胞的电泳速率,而酸性及中性PLA则影响较小,提示碱性PLA抗凝活性可能与膜磷脂特异活性部位的结合反应有关。     

蝮蛇突触前神经毒素的纯化及其生化性质的进一步研究

本文在前文的基础上,改进了蝮蛇神经毒素的分离方法,纯化了蝮蛇毒中的两个神经毒素之一,突触前神经毒素Agkistrodotoxin(简写为ATX),并对其生化特性进行了分析。应用DEAE-纤维素柱层析、CM-葡聚糖凝胶柱层析和聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳等方法分离纯化,得到一个均一的神经毒素蛋白,经聚丙烯酰胺凝胶在pH碱性和pH酸性电泳鉴定,都呈现一条区带。氨基酸定量分析结果表明,此神经毒素由121个氨基酸组成,由此计算出的分子量为13,700,与用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测得值接近。N末端是门冬酰胺,C末端是丝氨酸。纯化后的神经毒素显示磷脂酶A活性,比活相当于粗毒的11倍。     

蝮蛇突触前毒素的结晶及其物化性质的鉴定

江苏和浙江省一带所产的蝮蛇(Agkistrodon halys Pallas)毒,按前文所描述方法,分离出二个主要神经毒组分。经生理学鉴定其中一个具有选择性地阻断神经肌肉接头突触前传递过程的作用。用等电聚焦板电泳从该组分制备出经聚丙烯酰胺圆盘电泳鉴定为一均一条纹的突触前毒素,定名为蝮蛇神经毒素(agkistrodotoxin),蝮蛇神经毒素对小白鼠(腹腔注射)的最小致死量为每公斤体重55微克,在90℃下保温20分钟毒性不变,用中性连续或碱性不连续SDS圆盘电泳测定的分子量为13,400,不含亚基,用等电聚焦圆盘电泳测得等电点为6.9,在12℃对34%饱和硫酸铵(pH7.0)透析可得长方形晶体。关于蝮蛇神经毒素的其他生理特性,以及蝮蛇毒中其他神经毒素的纯化和鉴定将在另文发表。