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本实验采用地高辛标记前胰岛素寡核苷酸探针原位杂交组织化学技术,研究了Wistar大鼠胰腺组织胰岛素基因的表达。实验用Wistar大鼠5只,胰腺经4%多聚甲醛灌注固定,并在同一固定液中后固定24h,常规石蜡包埋切片。结果表明,经前胰岛素寡核苷酸探针杂交的胰腺切片中,胰岛B细胞呈蓝色。杂交反应物位于B细胞的细胞质和部分核仁中,胞核无色。胰岛其它细胞及胰腺外分泌部腺泡细胞无杂交反应物。对照切片中均无阳性信号出现。结果表明地高辛标记寡核苷酸探针不仅具备非同位素标记探针的优点而且能精确检测特异性mRNA的表达。本研究方法操作便利,可靠精确,重复性好。 相似文献
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本文记述分布于我国陕西太白山的园蛛科Araneidae尖腹蛛属Aculeperia一新种,太白尖腹蛛Aculeperiataibaishanensissp.nov.,模式标本分别保存河北教育学院和西安师范学院。 相似文献
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cⅠ857基因的体外定位同义突变陈南春,高辉,陈苏民,杨萍,刘新平(西安第四军医大学分子生物学研究所,西安710032)外源基因要在大肠杆菌中获得高表达,需要合适的SD序列和可调控的强启动子[1]。PL启动子在原核启动子中属强启动子,它受cⅠ基因产物... 相似文献
8.
RNA干扰(RNA interference,RNA i)是由双链RNA(doub le-stranded RNA,dsRNA)引发的转录后基因沉默(posttran-scridptional gene silenc ing,PTGS)。dsRNA经D icer酶降解成21-23nt的siRNA,并以其为模板,特定位点、特定间隔降解与之序列相应的mRNA。随着RNA i机制的深入研究与广泛应用,目前该技术已经普遍应用于细胞周期研究中,在阐明各种调控机制的同时也为基因治疗提供了新靶点。 相似文献
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将胰岛素受体底物-1(IRS-1)的PH结构域(pleckstrin homology domain)编码序列克隆到融合表达载体pRSETA中,阳性克隆经IPTG诱导,表达出氨基端带6个连续组氨酸残基的融合蛋白。经检测,表达的目的蛋白一部分以可溶形式存在。利用Ni-NTA金属螯合亲和层析法在非变性条件下对表达的目的蛋白进行纯化,纯度大于98%。将纯化的目的蛋白包被于聚苯乙烯平皿上作为靶蛋白,经过4轮淘筛,得到能够与IRS-1的PH结构域相结合的重组噬菌体克隆;从中随机挑选出50个克隆进行DNA序列测定,对获得的短肽序列进行了分析。并通过ELISA检测了这些克隆与IRS-1的PH结构域的结合活性。 相似文献
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SpltMNPV日本分离株gp41的克隆表达及gp41和ph的进化分析 总被引:1,自引:0,他引:1
从斜纹夜蛾核型多角体病毒(Spodopteralitura multicapsid nucleopolyhedrovirus,SpltMNPV)日本分离株(C3)基因组中克隆了gp41基因.该基因编码区含993bp核苷酸,编码分子量为36.9kDa的多肽.将该基因克隆至原核表达载体pET28a,经IPTG诱导后在大肠杆菌BL21(DE3)中获得了表达.应用CLUSTAL程序分析表明,SpltMNPV日本株(C3)gp41的核苷酸序列和氨基酸序列与SpltMNPV中国G2株相似性最高,均达99.9%.用MEGA分别构建了基于gp41和ph的聚类分析图和分子进化树,发现它们具有相似的拓扑结构.将这两个基因序列结合在一起构建进化树,该树的结构与基于gp41的进化树相似.突变率分析显示gp41的突变率高于ph,这意味着在杆状病毒进化过程中,gp41和ph面临不同的选择压力. 相似文献