结核分枝杆菌Rv3194c蛋白的亚细胞定位

【目的】Rv3194c基因编码的是结核分枝杆菌的PDZ信号蛋白,本研究探讨该蛋白的亚细胞定位,为其细胞结合蛋白的筛选奠定基础。【方法】从H37Rv基因组中扩增出编码只含有PDZ结构域的tRv3194c (Rv3194c 1–234 aa)的基因片段,在3′端加T2A和EGFP序列,一并插入真核表达载体构建出pcDNA3.1-tRv3194c-T2A-EGFP。将构建好的质粒瞬时转染L929细胞,并共感染重组痘苗病毒vTF7-3,用间接免疫荧光、流式细胞分选以及Western blotting检测融合蛋白的表达以及亚细胞定位。【结果】成功构建出真核表达载体pcDNA3.1-tRv3194c-T2A-EGFP,瞬时转染L929细胞后融合蛋白tRv3194c定位于线粒体膜上,且重组痘苗病毒vTF7-3的感染有助于靶蛋白表达水平的提高。【结论】Rv3194蛋白的PDZ结构域与线粒体外膜相关蛋白结合,为了解该蛋白在细胞内的致病机制提供重要线索。     

阿尔茨海默病炎症的潜在治疗靶点

炎症小体的激活与淀粉样蛋白的发生和炎性介质有关,因此通过对抗炎症小体来抵抗炎症可延缓阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)的发展,是一种很有前途的AD治疗策略.利用半定量的RT-PCR以及Western blot的方法对Aβ1-42刺激诱导的原代小胶质细胞和骨髓源巨噬细胞的炎症相关基因的转录表达情...     

miR9-2在免疫细胞发育功能中的初步研究

该研究利用CRISPR/Cas9技术构建miR9-2(micro RNA9-2)敲除小鼠,并通过流式细胞术初步鉴定miR9-2对B细胞和T细胞的影响。通过设计成熟miR9-2(mature miR9-2)序列左右两侧sgRNA1和sgRNA2,并连接pX459线性化载体。将体外转录后的单链sgRNA1、sgRNA2以及Cas9蛋白共同注射到受精卵的雄原核中,以获得miR9-2敲除小鼠。通过流式分析,观察WT(Wild-type)小鼠和杂合子(miR9-2^+/-)小鼠相关免疫细胞的百分比和细胞数的变化情况。该研究成功构建miR9-2敲除小鼠杂合子模型。流式数据分析表明,与WT小鼠相比,杂合子小鼠脾脏中的总B细胞、CD4⁺和CD8⁺T细胞数均显著下降;与WT小鼠相比,杂合子小鼠骨髓中总B细胞数百分比和细胞数均显著下降;未成熟B(immature B)细胞、祖前B(pro-pre B)细胞、前B(pre B)细胞的百分比和其对应细胞数均显著下降,而成熟B(mature B)细胞的百分比显著上升,其细胞数则变化不大。骨髓中, m...     

辅酶Q10的生物合成及其高表达研究进展

辅酶Q10(CoQ10)不仅是呼吸链上的电子传递体,同时也具有抗氧化功能。目前全球市场上的CoQ10正处于一种供不应求的状态。我们简要论述了CoQ10的结构、性质、功能及其生物合成过程,同时概括总结了现阶段为提高CoQ10产量而采用的新型技术手段。