两步串联层析法纯化抗TNF-α单克隆抗体北大核心CSCD

旨在建立从重组CHO细胞发酵培养液中纯化抗TNF-α单克隆抗体的两步串联层析法。将含有抗TNF-α单克隆抗体的料液经两次离心、一步过滤的预处理后,用protein A填料捕获,阳离子填料Sourec30精细纯化。精细纯化过程中利用Do E的方法,采用CCF(Central composite face)设计,探讨了洗脱p H值及盐浓度对纯化的影响。纯化后的抗TNF-α单克隆抗体经HPLC以及毛细管电泳,检测其浓度、纯度以及多聚体含量。结果显示,亲和层析的最佳洗脱条件为p H4.0。通过DOE优化,为达到质量目标(回收率90%以上,纯度97%以上,多聚体0.3%),筛选出最佳洗脱范围为0.05-0.13 mol/L Na Cl以及p H5.7-6.0,选定p H6.0与0.10mol/L Na Cl作为Source洗脱条件,此时回收率94.3%,纯度97.3%,多聚体0.3%,其质量与参比制剂接近。     

疏花毛萼香茶菜中一新的对映-贝壳杉烷型二萜

从疏花毛萼香茶菜（Ｉｓｏｄｏｎ ｅｒｉｏｃａｌｙｘ ｖａｒ．ｌａｘｉｆｌｏｒａ）叶中分离得到一新的对映－贝壳杉烷型二萜,命名为疏花丁素（１）,通过波谱方法鉴定了它的结构。此外,还分离得到６个已知对映－贝壳杉烷型二萜化合物：疏花甲素（２）,毛萼晶Ａ－Ｃ（３－５）和Ｑ（６）,毛萼乙素（７）,以及ｃｉｒｓｉｍａｒｉｔｉｎ（８）和２α－羟基乌索酸（９）。     

有限元分析法在腰椎生物力学研究中的应用及新进展

有限元分析法是指对复杂形态物体的应力及应变进行分析,具有力学性能测试全面、客观、可重复性的特点。目前,有限元分析法已被广泛应用于脊柱畸形、腰椎损伤以及假体植入等人体复杂结构生物力学的研究中。本文主要介绍有限元分析法在腰椎的椎体、间盘、韧带及肌肉组织中的应用,结合其概念、原理、建模方法等,总结该方法在新型内固定物力学特性研究中的优势,探讨其对不同植骨内固定术式选择的临床意义。     

拟南芥BAK1基因转化及防御作用

将拟南芥BAK1基因采用Gateway方法连接到植物表达载体,通过侵花粉管进行转化,从基因和蛋白表达水平检测转化是否成功。以不同BAK1表达水平植株作为试验材料,分析BAK1在芜菁缩叶病毒(Turnip crinkle virus,TCV)-拟南芥(Col-0)亲和互作系统中对植株防御的影响。结果显示,在接种TCV后,BAK1缺陷型植株对TCV较为感病,衰老相关基因表达水平增加,表明BAK1能够增强宿主对病毒的防御作用。     

云木香化学成分研究 II

从丽江产云木香（ＳａｕｓｓｒｅａｌａｐｐａＣ．Ｂ．Ｃｌａｒｋｅ）根中分离得到的另外７化合物,它们分别是孕甾炮醇酮（ｐｒｅｇｎｅｎｏｌｏｎｅ）（１）,β－谷甾醇（β－ｓｉｔｏｓｔｅｒｏｌ）（２）葫萝卜甙（ｄａｕｃｏｓｔｅｒｏｌ）（３）,苯丙素甙（ｓｙｒｉｎｇｉｎ）（４）,木质素甙（１－ｈｙｄｒｏｘｙｐｉｎｏｒｅｓｉｎｏｌ－１－β－Ｄ－ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ）（５）油酸（ｚ,ｚ）－９,１２－ｏ     

虾青素对四氧嘧啶致糖尿病小鼠降血糖作用研究

为研究天然虾青素在四氧嘧啶致糖尿病小鼠体内的降血糖作用,将天然虾青素分为高、中、低3个剂量组给四氧嘧啶致糖尿病小鼠灌胃,以0．9％生理盐水为模型对照,以二甲双胍为阳性药物对照进行实验。结果表明：三个剂量的天然虾青素均能较好的降低四氧嘧啶致糖尿病小鼠的血糖水平,并能减缓糖尿病小鼠消瘦和多饮多食的症状,以高剂量组的效果最佳。进一步考察了高剂量的虾青素对正常小鼠的影响,发现其对正常小鼠血糖无显著影响。虾青素对四氧嘧啶致糖尿病小鼠具有明显的降血糖作用。     

大鲵铁蛋白重链FTH基因的克隆、鉴定及表达分析简

从大鲵皮肤cDNA文库中,筛选出大鲵铁蛋白重链AdFTH的cDNA序列,其全长为864 bp,开放阅读框为531 bp,编码176个氨基酸,5′和3′非翻译编码区(Untranslated region,UTR)分别为120 bp和214 bp,预测蛋白质的分子量为20.6 kD,理论等电点PI为5.41,预测蛋白无信号肽及跨膜结构,在5′-UTR的22—51 bp处有一个特殊的铁反应元件(Iron response element,IRE)。同源性和系统进化分析表明,铁蛋白重链在进化上有着较高的保守性。实时定量PCR结果表明,大鲵铁蛋白重链mRNA在各个组织中广泛表达,其中肝脏的表达量高于其他8种组织,表明肝脏是大鲵主要的参与铁储存代谢的器官。成功构建了大鲵铁蛋白重链的重组表达载体pET32a-AdFTH,利用大肠杆菌Escherichia coli BL21表达系统和Ni2+亲和层析方法,获得了纯度较高的重组大鲵铁蛋白,并证实重组大鲵铁蛋白(Recombinant AdFTH protein,rAdFTH)具有氧化和吸收铁离子的功能,为进一步制备AdFTH抗体了解其在大鲵体内的多种作用机制打下坚实的基础。     

850 nm波长微激光对肥大细胞脱颗粒及释放组胺的影响

目的:研究850 nm波长微激光对肥大细胞(RBL-2H3 (Rat basophilic leukemia))照射后组胺释放的影响.方法:肥大细胞铺于96板上,密度为5×104/孔,12 h后细胞经D-Hank's缓冲液清洗3次用于实验.肥大细胞经微激光照射15 min后,轻轻吸取细胞上清液,加入等量0.1 mmol/L的邻苯二甲醛,充分混匀,室温下反应20 min后,于荧光酶标仪上测量混合物的荧光光谱.结果:微激光照射之后的肥大细胞上清液,能发出440 nm左右的荧光,说明850 nm微激光能使肥大细胞脱颗粒,从而判断850 nm微激光能作为仿灸仪器的光源.     

人血管生成素-PE40融合蛋白基因的构建、表达及活性研究

利用 PCR扩增出人血管生成素 (h ANG)成熟肽的基因片段 .与绿脓杆菌外毒素缺失突变体PE40的基因连接后 ,克隆入 p UC1 9载体中 .测序后克隆入表达载体 p RSETB,构建成 h ANG-PE40融合基因的表达载体 .IPTG诱导 ,表达出分子量约为 58k D的 His6- ANG- PE40融合蛋白 ,占菌体总蛋白的 8% .Ni2 +- NTA树脂纯化表达蛋白 ,SDS- PAGE结果显示纯化重组蛋白为单一条带 .鸡胚绒毛尿囊膜鉴定表明重组蛋白体外能够有效地抑制血管的形成 .     

人血管生成素基因的优化表达及活性测定

血管生成素（ａｎｇｉｏｇｅｎｉｎ,ＡＮＧ）广泛存在于多种肿瘤组织中,在肿瘤发生的不同刺激新生血管的形成。利用基因工程技术生产血管生成素,对于研究血管生成素的作用机制及寻找抗血管生成素的药物具有重大价值。倡该基因在大肠杆菌中不能直接表达,本文根据原核翻译起序列的局部二级结构自由能设计了ＡＵＧ上下游序列,并利用ＲＴ－ＰＣＲ方法从人肺癌细胞系Ａ５４９中扩增出起始区改造的ａｎｇ基因,成功构建了人ＡＮＧ的高