大鼠尿激酶SYBR Green I real time RT-PCR引物的设计

设计用于SYBR Green I法实时定量逆转录多聚酶链反应(QRT-PCR)检测大鼠尿激酶型纤溶酶原激活因子(uPA)mRNA的引物。从基因库获取靶基因及相关序列,充分收集争分析相关生物信息学数据,应用Oligo 6.22设计出一对长度为21bp的引物,其GG含量为52.4%;上下游引物3’最稳定二聚体和及发夹结构的能量分别为-1.5、-0.40 kcal/mol和-3.5、-O.90 kcal/mol,引物间最稳定二聚体为-3.1 kcal/mol。5’端和中间△G值较高,高于3’端△G;引发效率分别455和403。实验证明,该引物能够高效、特异地实现对靶序列的检测,适用于SYBR Green I法实时定量检测(uPA)mRNA。     

大鼠尿激酶SYBR Green Ⅰ real time RT—PCR引物的设计

设计用于SYBR Green Ⅰ法实时定量逆转录多聚酶链反应（QRT—PCR）检测大鼠尿激酶型纤溶酶原激活因子（uPA）mRNA的引物。从基因库获取靶基因及相关序列,充分收集和分析相关生物信息学数据,应用Oligo 6．22设计出一对长度为21bp的引物,其GC含量为52．4％;上下游引物3’最稳定二聚体和及发夹结构的能量分别为-1．5、-0．40kcal／mol和-3．5、-0．90kcal／mol,引物间最稳定二聚体为-3．1kcal／mol。5’端和中间AG值较高,高于3’端AG;引发效率分别455和403。实验证明,该引物能够高效、特异地实现对靶序列的检测,适用于SYBR GreenⅠ法实时定量检测（uPA）mRNA。     

siRNA干扰小鼠睾丸支持细胞μPA表达的初步研究

该研究在验证小鼠睾丸支持细胞TM4有内源性uPA基因表达的基础上,针对uPAmRNA靶序列设计三段不同的siRNA序列（si-uPA）,通过瞬时转染TM4细胞,筛选确定uPA基因的有效干扰序列。将该有效干扰序列进行时效、量效实验,观察siRNA对TM4fi细胞uPAmRNA和蛋白表达的影响。结果显示,siRNA的最佳转染浓度为50nmol／L。三种si—uPA转染TM4细胞后,μPAmRNA和蛋白表达量均较空白对照组明显下降（P〈0．05）,以si—μPAl作用最为明显。si—μPAl转染24h后,转染组细胞μPAmRNA的表达均较对照组显著降低,其中100nmol／L组抑制效果最为明显,抑制率达到70％;随转染时间的延长,μPAmRNA表达持续降低,转染72h后,三组转染细胞μPAmRNA表达量分别为对照组的153．9％、35．3％和27．7％（P〈0．05）。该研究成功筛选出针对μPAmRNA靶序列的有效干扰序列,抑制效应持续至72h;同一时间点内,抑制效应随转染浓度的增加而增强,表现出良好的量效关系。