高速PCR用DNA聚合酶

ＰＣＲ（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ）技术自创始至今还不到１５年的时间 ,但它已以惊人的速度渗透到了工业、农业、医学、药学等各个领域〔１ ,２〕。ＰＣＲ技术的发明无疑给生物工程带来了历史性的转折 ,促进了生物工程 ,特别是基因工程研究的飞速发展〔３〕。近期 ,随着人类基因组计划等的实施 ,并伴随着生物芯片技术的推广 ,快速、高效的ＰＣＲ已成为ＰＣＲ技术发展的必然趋势。ＴａＫａＲａ推出的Ｚ ＴａｑＤＮＡ聚合酶（Ｚ是指Ａ、Ｂ……排列的最后一个字母 ,指最快的意思 ,为商品名）是为快速ＰＣＲ而研制成功…     

实时荧光PCR检测食品中致敏原芥末成分

对植物原料产品和植物源性食品中芥末成分的快速鉴定是避免过敏性疾病发生的重要措施。依据芥末Sin A1管家基因的核酸序列设计特异性引物和探针,对3种芥末样品和21种非芥末植物样品进行实时荧光PCR检测,结果显示,过敏原芥末管家基因的样品FAM通道有荧光信号检出,非芥末样品FAM通道均无荧光信号检出。灵敏度实验表明,植物原料产品中对芥末的检测低限可达到1 mg/kg。此外对市售的芥菜籽等样品和深加工的芥末致敏原参考物质(葡萄糖)进行实际样品的检测,均能很好检出致敏原芥末成分。     

微量RNA的cDNA PCR文库的构建

使用PCR（polymerase chain reaction)技术,调制了mRNA的cDNA PCR文库,实验证明,cDNA PCR文库能使原cDNA的量放大数百倍,同时,使用人体K562培养细胞的总RNA,对cDNA PCR文库法和反转录中的β-Actin的cDNA量进行了比较,cDNA PCR文库法中的β-Actin的cDNA量大于高于反转录中的β-Actin的cDNA量,使用75pg的人体K562培养细胞的总RNA,调制成50ul的CDNA PCR文库,使用1ul的CDNA PCR文库进行了PCR反应时,可对文库中β-Actin的CDNA进行PCR检测,因此,CDNA PCR文库显示了良好的信息放大性能。     

超高忠实性PCR用DNA聚合酶

ＰＣＲ（ＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ）法已在生物工程领域得到了广泛的应用,而ＰＣＲ法的推广完全得益于Ｔａｑ耐热性ＤＮＡ聚合酶。近年来,ＰＣＲ法的应用除生物工程领域外,已应用至工业、农业、医学、制药等与人们生活息息相关的各个领域。随着ＰＣＲ法的不断推广,人们对ＤＮＡ聚合酶的忠实性（Ｆｉｄｅｌｉｔｙ）要求越来越高,一般来说,ＴａｑＤＮＡ聚合酶在进行ＰＣＲ延伸反应过程中的错配率为０．５％左右。ＴａＫａＲａ公司独自研制成功的ＰｙｒｏｂｅｓｔＤＮＡ聚合酶是一种来源于Ｐｙｒｏｃｏｃｃｕｓｓ…     

崖椒的组织培养

植物名称:崖椒(Zarthoxylum schinifolium)。材料类别:崖椒萌发枝条的茎尖。培养条件:培养基:①1/2MS(大量元素)+BA0.3 mg/L(单位下同)+GA0.5+NAA0.03,②MS+BA0.5+GA0.5+NAA0.3,③1/2MS+IAA0.2。培养温度23⒍28℃,光照2000～2500lx,每日光照11～12小时。生长与分化情况:(1)茎尖在培养基①上,25天左右基部逐渐膨大,30天左右开始生长,约两个月可长成3cm左右的无根苗。(2)将无根苗剪成具     

可直接克隆PCR产物的克隆载体的构建

本文描述一种构建与PCR产物直接连接的克隆载体的方法。以高拷贝克隆载体pUC118为骨架载体,在pUC118质粒氨苄抗性基因的Eam1105 I 酶切位点上,以点突变的方式封闭Eam1105 I 酶切位点。经转化大肠杆菌JM109证实,该改造过的pUC118质粒,可使宿主细胞仍具有氨苄抗性。将一人工合成的具有两个Eam1105 I 酶切位点的互补寡聚核苷酸链（两端具有BamH I 接头）插入已封闭Eam1105 I 酶切位点的pUC118*载体的BamH I 位点,构成新的克隆载体,此质粒命名为pUC118E。该载体经Eam1105 I 酶切后,可产生3′末端突出一个T碱基的T-载体,能与PCR产物直接连接。 Abstract:A new method for construction of a cloning vector (T-vector) for direct ligation with PCR products was described.The T-vector derived from pUC118 in which the unique restriction site of Eam1105 I in the region of Ampr gene was deleted and an artificial DNA fragment flanking two Eam1105 I was introduced at the site of BamHI.The modified vector was named as pUC118E.A T-vector with 3′over hang end of a single T can be obtained via digesting of pUC118E with Eam1105I.PCR products can be easily cloned with this T-vector.