碱性磷酸酶标A蛋白加强的PAP技术

本文介绍一种碱性磷酸酶标Ａ蛋白加强的ＰＡＰ技术。采用ＰＡＰ技术、碱性磷酸酶标Ａ蛋白（ＰＡＡＰ）技术ＰＡＡＰ和加强的ＰＡＰ（ＰＡＰ－ＰＡＡＰ）技术显示下丘脑室旁核催产素（ＯＴ）能神经元。结果发现,其中使用ＰＡＰ－ＰＡＡＰ技术免疫反应产物的显色最深。此技术的原理可能是,由于Ａ蛋白分子至少有四个位点能与ＩｇＧ分子的Ｆｃ段高亲合性地结合,故在该技术中,先经过ＰＡＰ程序的三步免疫反应并显色后,每个与一抗结合的二抗分子上和每个与二抗结合的ＰＡＰ复合物分子上各暴露一个能与Ａ蛋白分子结合的Ｆｃ段,在随后经过ＰＡＡＰ技术处理时,部分ＰＡＡＰ复合物分子就结合在这些Ｆｃ段上,经显色后,ＰＡＡＰ技术显示的浅紫兰色与ＰＡＰ技术显示的浅棕褐色重叠,变成更深的反差明显的深棕褐色。     

微管相关蛋白tau在不同年龄大鼠海马内的定位分布特点

目的 检测微管相关蛋白tau和Ser396/404位点磷酸化tau在胚胎期大鼠和出生后直至成熟期大鼠海马内的表达及变化规律,浅析与神经细胞分裂和分化的关系.方法 用免疫组织化学SABC法显示孕18d、出生后1d、1w、2w、2m的大鼠脑冠状切面总tau（R134d）、Ser396/404位点磷酸化tau（PHF-1）的表达.结果 ①胚胎期大鼠海马CA区的锥体细胞数量明显多于出生后,随着脑的发育,锥体细胞层的神经细胞数量逐渐下降;②孕18d大鼠海马内有丰富的总tau和PHF-1 tau的表达,并且海马内各区的阳性物质表达均匀,生后1d和1w两种物质表达仍然很强,阳性产物主要分布在海马CA1和CA2区以锥体细胞轴突为主要成分的始层,在锥体细胞树突集中的分子层和胞核内也有少量分布,而在生后2w和2m大鼠海马内各区均未见密集的阳性产物表达.结论 不同年龄大鼠海马内总tau和PHF-1 tau的表达和分布变化可能与神经系统发育过程中细胞的分裂和分化有关.     

铅致大鼠记忆受损及海马AChE阳性纤维的改变

本实验采用明暗箱被动回避反应和穿梭箱条件性回避反应测定, 探讨了铅对大鼠学习与记忆的损害作用。应用酶组织化学方法观察了铅致大鼠海马的结构改变。行为测定显示, 大鼠饮１０％ 醋酸铅水液之前和之后, 其进洞潜伏期 （ｓｔｏｐｔｈｒｏｕｇｈ ｌａｔｅｎｃｙ, ＳＴＬ） 与对照组无明显差异, 而饮醋酸铅水液后, 其条件性回避反应率（ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｅｄ ａｖｏｉｄａｎｃｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｒａｔｅ, ＣＡＲＲ） 较对照组明显下降（ｄ４－ ｄ１４, Ｐ＜ ００５）, 表明大鼠饮醋酸铅水液后长时记忆不受影响, 而短时记忆受到损伤。组织化学反应染色显示实验组海马腔隙分子层内ＡＣｈＥ阳性纤维面积百分数较对照组明显减少（Ｐ＜ ００５）, 且纤维变细, 膨体减少。推测铅致大鼠短时记忆能力下降, 可能与海马内胆碱能纤维减少有关。     

慢性捆绑紧张致大鼠记忆受损及海马神经元NOS和Tau5的变化——组织化学与免疫组织化学研究

目的　探讨慢性捆绑紧张对大鼠学习与记忆的影响及其可能的神经生物学机制。方法　选雄性 SD大鼠 18只 ,其中 10只为实验组 ,8只为对照组。对实验组采用捆绑器每天捆绑 6 h,2 1天后用 Y迷宫对两组大鼠进行行为检测 ,并用酶组织化学和免疫组织化学方法观察海马内一氧化氮合酶 (NOS)阳性神经元及 Tau蛋白 (Tau5 )免疫反应的变化。结果　 1实验组大鼠学会躲避电击的次数为 35 .7± 7.5次 ,对照组为 2 5 .2± 2 .8次 ,P<0 .0 1;2海马右侧 CA1 区 NOS阳性神经元数目 ,对照组 2 7.2± 4.8个 ,实验组 38.9± 6 .4个 ,P<0 .0 5 ;NOS阳性神经元胞质平均灰度 ,对照组 170 .7± 11.8,实验组 16 2 .5± 12 .6 ,P<0 .0 5 ;3海马右侧 CA3 区 Tau5免疫阳性产物的平均灰度 ,对照组 16 1.7± 12 .8,实验组 145 .8± 13.8,P<0 .0 5。结论　一氧化氮产生过多而导致的神经毒性作用可能是慢性捆绑紧张导致动物学习与记忆功能受损的部分神经生物学机制 ,而海马 CA3 区神经元内所有的 Tau蛋白 (磷酸化及非磷酸化的 Tau)的总量增多说明 Tau蛋白的变化可能在此过程中起一定的作用。     

不同胚龄大鼠胚胎组织切片制作体会

全胚切片标本是发育生物学教学及其相关研究的基础。本实验采用石蜡包埋和免疫组织化学技术对如何制作完整和连续的不同胚龄之全胚切片进行了探索,并研究了亨廷顿相关蛋白1在孕中期胚鼠的表达。     

Mfn-2降低促进培养的大鼠血管平滑肌线粒体自噬

目的研究线粒体融合蛋白基因2(Mfn-2)降低表达对培养的大鼠血管平滑肌细胞(rVSMCs)中线粒体自噬的影响。方法将rVSMCs采用无血清培养基同步化48h后,分别感染腺病毒载体Adv-Mfn-2-SiRNA和空载Adv-Lac-Z作为实验组和对照组,实验分为三部分,其中第一部分提取细胞总蛋白后进行Western Blot分析Mfn-2的表达,第二部分JC-1处理后运用流式细胞术检测线粒体膜电位的变化,第三部分通过透射电子显微镜显示线粒体超微结构的改变以及自噬体的形成和积累过程。结果 Adv-Mfn-2-SiRNA以感染复数60pfu/细胞感染同步化后的rVSMCs 24h后,Western Blot分析表明,Mfn-2的表达与对照组相比明显降低(P0.05);流式细胞术检测结果显示实验组较对照组线粒体膜电位明显下降(P0.05);透射电子显微镜显示实验组线粒体减少,而自噬体明显增多。结论 Mfn-2降低可导致培养的大鼠血管平滑肌线粒体自噬大量增加     

组织学与胚胎学全英语教学实践

顺应医学教育国际化趋势,我们进行组织学与胚胎学全英文教学实践活动已有八年。作为一门医学基础课程,组织学与胚胎学全英文教学改革之初也遇到教材、师资、授课方法等诸多困难,通过学校的政策扶持以及教研室全体教师的努力,目前组织学与胚胎学全英文课程教学体系已日趋完善、成熟,在教学内容、教学方法、教材编写、师资建设等方面取得了长足的进步,为医学生进行后续全英文课程的学习打下坚实的基础。     

蝙蝠葛碱拮抗缓激肽引起的钙稳态改变 及细胞骨架蛋白的异常磷酸

为研究蝙蝠葛碱 (dauricine , Dau) 拮抗缓激肽 (bradykinin , BK) 诱导的 Alzheimer 样钙稳态失衡及细胞骨架蛋白异常磷酸化的作用,采用双波长荧光分光光度计测定细胞内钙离子浓度 ([Ca2+] i) ,用 MTT 法检测细胞代谢水平,用免疫组织化学方法观察 tau 蛋白表达和磷酸化 . 结果表明,Dau (3 μmol/L , 6 μmol/L) 可抑制 BK 诱导的 [Ca2+]i 升高,保护 BK 引起的神经元代谢降低,拮抗 BK 引起的 tau 蛋白异常磷酸化和聚集 . 结果提示： Dau 可拮抗 BK 诱导的 Alzheimer 样钙稳态失衡及细胞骨架蛋白异常磷酸化的作用 .     

Cdk-5过度表达对Tau蛋白磷酸化的影响

目的 实验旨在细胞水平研究cdk-5过度表达对微管相关蛋白tau的磷酸化的影响。方法 利用基因转染技术建立过度表达cdk-5的鼠成神经瘤细胞株(N2a细胞株),免疫沉淀及酶活性检测法检测cdk-5的酶活性,免疫荧光技术和免疫印迹技术检测细胞内tau蛋白的磷酸化状况。结果 在N2a细胞株转染组中,cdk-5表达增加,并使得抗体tau-1显色减弱,PHF-1显色增强,提示tau蛋白在Ser199/202,Ser396／404位点过度磷酸化。与此同时,cdk-5酶活性较未转染组提高3.5倍。结论 这些结果提示细胞水平的cdk-5的过度表达会导致cdk-5酶活性增加和tau蛋白过度磷酸化,而过度磷酸化的tau蛋白可能参与了AD的病理过程。