小麦苗期地下茎蛋白质双向电泳技术体系的优化

以东农冬麦1号为材料,对苗期地下茎处的蛋白提取方法、蛋白溶解、上样量、胶条的转移等方面进行了试验.结果表明:在蛋白提取方面,TCA/丙酮法(T法)和尿素/硫脲法(N法)相比T法能减少低丰度蛋白的损失得到蛋白点数更多的图谱.在蛋白溶解方面,经过两次水化液溶解的蛋纯度较高,在等电聚焦时能保持8000伏较高电压.上样量方面,10mg粗蛋白溶于两次水化液能得到清晰、分离效果好、蛋白点数较多的图像.胶条转移方面,先向胶面中加入400μl0.3%普通琼脂糖溶液后,用200μl的电极缓冲液冲洗胶条支撑膜会使胶条顺利转移到第二向胶面上且胶条与胶面间不会产生气泡.     

不同抗寒性冬小麦品种分蘖节低温诱导蛋白比较

通过蛋白质双向电泳和质谱技术,对低温前后抗寒品种东农冬麦1号和非抗寒品种济麦22的蛋白质组进行了比较分析.结果表明：在pH 4～7范围内,在东农冬麦1号和济麦22分蘖节蛋白表达图谱中发现55个蛋白点在低温胁迫后的表达量与低温前有明显差异,其中47个点在两个品种中均有表达.低温处理后,有23个蛋白点的丰度值变大,东农冬麦1号的绝对丰度高于济麦22;7个蛋白点的丰度值变小,东农冬麦1号的绝对丰度低于济麦22;东农冬麦1号特有8个蛋白点表达量上升.所有上调的蛋白点中东农冬麦1号的表达量是济麦22的2.1~16.5倍,超过4倍以上的点有10个;所有下调的点中东农冬麦1号的表达量是济麦22的0.1～0.4倍.对所有的差异蛋白点进行质谱分析,并通过数据库检索进行蛋白质鉴定,得到了其中51个蛋白的完整肽指纹图谱,这些蛋白中逆境蛋白占15.7%、代谢相关蛋白占27.5%、信号分子占19.6%、未知蛋白占9.8%、其他类蛋白占27.4%.这些蛋白的表达可能对东农冬麦1号抗寒性具有重要作用.     

月季eIF－5A基因的表达增强宿主大肠杆菌对高温和低温的耐性

真核生物翻译起始因子（eIF－5A）是在调控生物生长发育、衰老与环境响应中起重要作用的蛋白质。设计eIF－5A基因的兼并引物,对月季受高温诱导的叶片cDNA进行PCR扩增,获得特异性片段回收、克隆和测序,确定该cDNA为月季eIF-5A(命名为RceIF5A),含有480bp的核苷酸,编码159个氨基酸。将该cDNA序列克隆到原核表达载体PET32a中,获得重组子pET32a－eIF5A。高温（50℃）和低温（4℃）胁迫下含有该基因的大肠杆菌(Escherichia coli) BL21 (pET32a-eIF5A)比E. coli BL21 (pET32a)有明显的抗性提高,据此认为含有重组子的E. coli BL21 (pET32a-eIF5A)对高低温的抗性可能与eIF-5A基因的表达相关。该基因的GeneBank登录号为 EF177192。     

小麦地下茎双向电泳技术体系的优化

以东农冬麦1号为材料,对苗期地下茎处的蛋白提取方法、蛋白溶解、上样量、胶条的转移等方面进行试验,结果表明：在蛋白提取方面,TCA/丙酮法（T法）和尿素/硫脲法（N法）相比T法能减少低丰度蛋白的损失得到蛋白点数更多的图谱;在蛋白溶解方面,经过两次水化液溶解的蛋白纯度较高,在等电聚焦时能保持8000伏较高电压;上样量方面,10mg粗蛋白溶于两次水化液能得到清晰、分离效果好、蛋白点数较多的图像;胶条转移方面,先向胶面中加入400μl 0.3％普通琼脂糖溶液后,用200μl的电极缓冲液冲洗胶条的支撑膜会使胶条顺利转移到第二向胶面上且胶条与胶面间不会产生气泡。     

拟南芥低盐敏感突变体的筛选

通过对ein3-1功能缺失型突变体种子进行EMS诱变,筛选到47株盐敏感突变体。根据对盐敏感程度的不同将其分为3类,分别为低盐超敏感突变体(low concentration of salt hyper-sensitive mutants,lsh),低盐中等敏感突变体(low con-centration of salt moderate-sensitive mutants,lsm)和低盐弱敏感突变体(lowconcentration of salt slight-sensitive mutants,lss)。以其中一株lss-3为例,进行了深入研究。根据遗传分析和生理试验表明,lss-3是以ein3-1为背景的隐性双突变体,而且具有比Col-0和ein3-1更加敏感的盐表型。三重反应表明,lss-3与ein3-1类似,表现出对ACC不敏感的表型。推测lss-3突变的基因可能与乙烯信号途径组分EIN3有关,也可能与之无关,仅是参与抗盐的一个新基因。