用聚合酶链式反应法检测人乳头状瘤病毒DNA

实验研究表明,宫颈癌的发生和发展与人乳头状瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)的感染有着密切关系。约有80％的宫颈癌组织中含有人乳头状瘤病毒第16型(HPV 16)及18型(HPV 18)的DNA,因此,检测宫颈癌组织中的HPV DNA对研究宫颈癌的发生和发展机制以及宫颈癌的防治都有重要意义。目前检测HPV DNA的手段都采用DNA探针杂交技术,该方法要有高比活的同位素,而且费时。聚合酶链式反应(Polymerase Chain Rea-     

用“乒乓效应”提高包装细胞培养上清中逆转录病毒滴度的方法

逆转录病毒是基因治疗研究中最为主要的基因转移载体,目前批准的基因治疗试验方案中绝大多数采用逆转录病毒作为载体。逆转录病毒具有稳定、安全、高效的优点,但仍存在病毒滴度低的问题。目前多从质粒结构和病毒包装两方面来提高病毒滴度。 将HyTK基因替换逆转录病毒载体GlNa     

基因转移的DNA病毒方法

在基因治疗中,作为基因转移的载体,迄今几乎都用逆转录病毒,但是在某些情况下,ＤＮＡ病毒作为载体具有明显的优越性,本对腺相关病毒、腺病毒和疱疹病毒作为外源基因载体进行了简要的讨论。     

维生素D缺乏症和老年骨折

很多老年人骨骼脆弱,尤其在北方,老人和小儿久居室内,很少暴露在阳光下,患维生素D(V-D)缺乏症较多,但以症状隐蔽,往往被人们所忽视。该介绍测定人体V-D状况的方法和诊断V-D缺乏的重要性,以引起医学界的重视,增进人民的健康。     

HyTK基因转移联合ganciclovir对瘢痕成纤维细胞的体外杀伤作用

增生性瘢痕和瘢痕疙瘩的过度增生主要是由于高度增生活性的成纤维细胞的数量异常增多及细胞外基质合成增加所致．用逆转录病毒载体介导单纯疱疹病毒胸苷激酶基因（ＨＳＶｔｋ）的转移,随后应用药物９－（１,３－二羟基－丙氧基－甲基）鸟嘌呤（ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ,ＧＣＶ）可选择性地杀死增生细胞．采用组织块贴壁法在体外原代培养成功增生性瘢痕病人的成纤维细胞（ＦＢ）．重组逆转录病毒ＧＴＫ转染ＦＢ细胞后,用ｈｙｇｒｏｍｙｃｉｎＢ筛选出阳性细胞克隆（ＦＢ／ＧＴＫ）,经ＰＣＲ方法检测证明ＨｙＴＫ基因已成功地导入ＦＢ中,但不含可复制的辅助病毒．分别用不同浓度的ＧＣＶ作用于ＦＢ／ＧＴＫ及ＦＢ,光镜下观察不同时间后细胞形态变化及ＭＴＴ法检测细胞活性．结果表明,ＧＣＶ浓度大于０．１μｍｏｌ／Ｌ时即对ＦＢ／ＧＴＫ有显著的杀伤作用,且具有强有力的“旁观者效应”     

TK基因/GCV对瘢痕组织成纤维细胞增生的体外抑制研究

增生性瘢痕和瘢痕疙瘩是在创伤延迟愈合期间,由于过度胶原沉积而形成的突出皮肤表面或从原损伤部位侵入周围正常皮肤的增殖性瘢痕组织,是整形外科和皮肤科难治疾病之一。传统的临床治疗由于缺乏充分的分子生物学基础,目前仍无一种明确有效的方法,主要问题是难以控制其复发。我们通过逆转录病毒载体GTK介导HSV-TK基因转移联合9-(1,3-二羟-2-丙氧甲基)鸟嘌呤(更昔洛韦,ganciclovir,     

非缺失型α-地中海贫血分子缺陷的初步研究

α-地中海贫血(简称α-地贫)是以α-珠蛋白链合成缺如(α~0-地贫)或减少(α~ -地贫)为特征,具有高度异质性的单基因遗传病。α-地贫分子缺陷有基因的大片段缺失和非缺失型突变两大类。α-珠蛋白基因缺失是导致α-地贫的主要原因。非缺失型突变是指α-珠蛋白基因的点突变或少数几个碱基的改变,主要发生于α2珠蛋白基因。该类突变导致的α-地贫称为非缺失型α-地贫。国内外近年来的研究使越来越多的非     

警惕高同型半胱氨酸血症

血清同型半胱氨酸浓度增高使老年人容易发生骨折,也使患心脏病的危险性增加。现认为,可能是由于高水平的同型半胱氨酸能抑制胶原蛋白的交联,而亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）有TT突变基因型的患者．因为此酶的活性降低,通常伴有同型半胱氨酸水平增高和叶酸水平降低。此外,雌二醇能通过增强抗氧化剂系统以防止高同型半胱氨酸血症引起的动脉粥样硬化症。故服用B族维生素和应用雌激素替代疗法是有益的。     

人乳头瘤病毒16型 E7蛋白在子宫颈癌细胞内的定位

应用重组质粒在大肠杆菌中表达人乳头瘤病毒(HPV)16 型 E7 基因.以所产生的 E7 融合蛋白为抗原免疫家兔,制得抗 E7 蛋白抗血清.在子宫颈癌组织切片中用此抗血清作免疫组化染色(胶体金标记染色法).在光学显微镜下可观察到癌细胞中存在 E7 抗原黑色颗粒,位于细胞核内.主要附着于核膜,可证明 E7 基因在 HPV16 感染的子宫颈癌细胞中有强烈表达;提示 E7 基因可能即为 HPV16的癌基因.     

TK/GCV系统体外诱导成纤维细胞凋亡

 在体外培养并鉴定增生性瘢痕成纤维细胞（ Ｆ Ｂ）的基础上,采用重组逆转录病毒 Ｇ Ｔ Ｋ 介导并联合应用 ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ 对 Ｆ Ｂ细胞进行体外杀伤,以探究 Ｔ Ｋ／ Ｇ Ｃ Ｖ 系统体外杀伤成纤维细胞的机制．经光镜、电镜及凝胶电泳等实验发现,在 Ｔ Ｋ／ Ｇ Ｃ Ｖ 对瘢痕成纤维细胞的杀伤过程中存在明显的细胞凋亡现象．这提示 Ｔ Ｋ／ Ｇ Ｃ Ｖ 系统对体外培养的瘢痕成纤维细胞的杀伤作用部分是通过细胞凋亡途径实现的．