蛋白电泳铜染色后胶中生物活性IL-2的回收

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)已广泛用于蛋白质样品组分分析。通常的方法染色后蛋白质和肽即固定在凝胶上,尽管凝胶用SDS平衡后可对蛋白质进行洗脱或转移,但由于回收率低、耗时,同时回收的蛋白只能保存其抗原性而生物活性丧失,因而限制了SDS-PAGE在蛋白质回收领域中的应用。最近     

我国生物医药产业发展展望

21世纪是生命科学和生物技术的世纪,继信息技术革命之后,以生物技术为主导的技术革命已经拉开序幕.随着以生命科学和生物技术为主导的新科学革命的逐步形成,以医药生物技术为核心的第一次生物技术浪潮正在快速纵深发展.从20世纪70年代第一家生物技术制药公司(Genentech)成立至今,生物医药已经历30余年的发展,生物制药在医药产业中的地位越来越重要.     

基因工程产物纯化工艺的设计

基因工程产物纯化工艺的设计徐明波,马贤凯（军事医学科学院基础医学研究所）工艺的设计和操作单元的选择是一个在尝试和失败中不断积累经验的过程,与工艺设计者的知识水平与经验有关。前人工作的总结是获得设计思路的重要途径［１］。一、影响工艺设计的因素分析１．活性、纯度和杂质分析首先应建立活性、纯度及可能含有杂质的检测方法,以评价工艺的可靠性。     

树脂载体固定S-腺苷甲硫氨酸合成酶的研究

目的:筛选一种适合S-腺苷甲硫氨酸合成酶固定化的树脂载体,进行固定化工艺优化及固定化酶性质研究。方法:以固定化率和表观酶活回收率为指标,筛选固定化效果最佳的一种树脂,采用单因素实验对固定化条件进行优化。结果:阴离子交换树脂载体ESR-2表现出最优的固定化率(94.03%)和酶活回收率(47.45%);最佳固定化条件为加酶量4U/g、pH 8.0、15℃吸附10h,最佳条件下固定化酶表观酶活为2.1U/g,表观酶活回收率达51.6%。固定化酶的最适pH为8.5,最适温度为35℃,连续反应10批次后酶活剩余77.92%。结论:树脂载体ESR-2固定化S-腺苷甲硫氨酸合成酶酶活及稳定性较好,能够用于S-腺苷甲硫氨酸的工业化大规模生产。     

HeLa细胞热休克蛋白的代谢动力学

 HeLa细胞经45℃,15min应激后,可诱导一组分子量为100,85,73,70,54kD的热休克蛋白,其中分子量为73/70kD的HSP产量最高。在产生HSP的同时,正常蛋白质合成受到抑制,并在随后数小时内恢复。HSP73/70在应激后能迅速诱导产生,应激后4—6小时为其合成高峰,10小时后明显减少,24小时恢复正常。其分解遵循指数规律,半衰期为49.9小时。     

无岩藻糖修饰曲妥珠单抗的研究进展

乳腺癌是女性常见癌症中致死率最高的恶性肿瘤疾病之一,严重危害女性的生命健康。其中,以HER2阳性乳腺癌发病率和致死率最高。曲妥珠单抗在治疗HER2阳性乳腺癌上具有显著的临床疗效,然而由于患者耐药性的产生、HER2表达异常、用药成本高等原因,曲妥珠单抗在实际临床使用过程中存在极大的局限性。研究发现敲除抗体Fc段寡糖的核心岩藻糖可明显提高曲妥珠单抗的ADCC效应,改善其临床疗效。综述了如何敲除曲妥珠单抗的核心岩藻糖、无岩藻糖修饰曲妥珠单抗的临床优势以及提高其ADCC效应的其他Fc段改造方法。     

重组人巨噬细胞集落刺激因子的结构与功能

重组人粒细胞──巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF) 已经在原核、真核细胞表达并得到纯品,为它的结构与功能研究提供了有利条件．目前国内外对于rhGM-CSF的结构与功能研究主要集中在晶体结构、化学修饰、溶液中构象和稳定性以及突变和分子设计方面．分子结构与功能的关系以及与GM-CSF受体作用机理研究也取得了突破性进展．     

脯氨酰顺—反异构酶的纯化及对重组蛋白质折叠反应…

脯氨酰异构是蛋白质折叠反应的限速步骤之一,体内被脯氨酰顺－反异构酶（ＰＰＩ）所催化。为了研究ＰＰＩ在重组蛋白体外折叠复性中的作用,我们自猪肾脏中纯化了ＰＰＩ,并对重组蛋白的酶促折叠过程进行了探讨。结果表明,ＰＰＩ催化的重组蛋白的折叠率和比活性,ＰＰＩ催化的重组蛋白的折叠反应主要是提高了它们了折叠速率,而不增加正确折叠率的比活性。ＰＰＩ在很低的浓度下即有很高的催化活性。     

重组白细胞介素2体外折叠的实验研究

包涵体中的重组蛋白抽提后可以在变性状态下纯化,而纯化后的体外折叠（即复性）是基因工程下游处埋中的重要环节。荧光光谱研究表明,ＩＬ－２分子折叠过程中荧光强度逐渐减小,最大发射峰由３１６ｎｍ红移到３４８ｎｍ。以Ｔｒｐ残基的暴露程度反映分子的折叠状态。ＧＭ－ＣＳＦ在折叠过程中的荧光强度有类似变化;凝胶排阻ＨＰＬＣ可以检测折叠过程中的聚合体;而反相ＨＰＬＣ可以将ＩＬ－２分成三个相互独立的异构体色谱峰。据此可以计算出ＩＬ－２分子的正确折叠率。常用的稀释复性方法,随着ＩＬ－２浓度的增高,它的正确折叠率逐渐降低,蛋白浓度的对数与正确折叠率之间大致呈线性关系。当ＩＬ－２浓度为１ｍｇ／ｍＬ时,其正确折叠率仅为３０％,而采取较低的蛋白浓度进行复性会因大量的样品体积导致后期纯化的困难。     

凝血因子Ⅶ及其重组表达新进展

凝血因子Ⅶ是一种维生素K依赖型的单链糖蛋白,在凝血过程中发挥着极其重要的作用,在临床上有广泛的应用,可用于伴有抑制物的血友病、先天性FⅦ缺乏症、血小板无力症及外科手术或严重外伤导致的创伤出血等止血用途.基因重组技术提供了能够大规模制备人凝血因子Ⅶ的有效途径,近年来已尝试并建立了多种人凝血因子Ⅶ的重组表达系统.对重组人凝...