丙酮酸氧化酶在压力下的解离

本文通过测定丙酮酸氧化酶内源荧光谱和荧光偏振的变化研究了该酶在1—2200bar压力下的解离。研究结果表明,在压力作用下酶的辅基FAD不可逆地从酶分子上解离下来,并因此引起酶的失活;酶亚基在压力下的解离是可逆的,在5℃,pH7.6条件下,该酶的解离自由能⊿G°为29.89k cal/mol,解离标准体积变化⊿V°为-220ml/mol。脱辅基丙酮酸氧化酶的解离自由能为24.93k cal/mol,证明FAD对酶有稳定作用;⊿V°则为-153ml/mol,减少了近30％,表明FAD对亚基间的空间大小有很大贡献。经胰凝乳蛋白酶部分酶解所活化的酶的解离⊿G°和⊿V°均有所增加,底物丙酮酸亦有相同的影响。研究还表明,碱性pH条件能促进丙酮酸氧化酶的解离。在此研究中,我们也观察到了Weber和Ruan在乳酸脱氢酶、甘油醛-3-磷酸脱氢酶等研究中报道的"conformational drift"现象。     

大熊猫子宫钙调素的分离纯化和性质的研究

以大熊猫子宫为材料分离纯化了钙调素,经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ,ＰＡＧＥ和等电聚焦电泳鉴定,表现均一。分子量为１８８００道尔顿,等电点为３．６。该蛋白质分子的Ｎ－末端为封闭的。大熊猫子宫钙调素具有其它来源钙调素所特有的一些性质。对环核苷酸磷酸二酯酶有明显的激活作用,还发现对超氧化物歧化酶也有一定激活作用。电泳行为受Ｃａ＾２＋影响而出现特征性电泳改变,在含有Ｃａ＾２＋的ＳＤＳ凝胶电泳中,电泳速度比ＥＧＴＡ存     

蚯蚓新钙结合蛋白(NCBP)的二级结构及Ca~(2+)、Tb~(3+)离子的影响

应用红外光谱技术定量测定了水化膜中蚯蚓新钙结合蛋白（ＮＣＢＰ）的二级结构及在不同比例Ｃａ２＋、Ｔｂ３＋离子的作用下其二级结构的变化。结果表明,ＮＣＢＰ中α－ｈｅｌｉｘ含量较低而β－ｓｈｅｅｔ的含量较高,且随不同比例金属离子的加入,１６２９ｃｍ－１处β－ｓｈｅｅｔ峰的变化较明显。同时发现,ＮＣＢＰ具有钙结合蛋白家族特征的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ现象,但不具有激活ＰＤＥ靶酶的活性,初步认为,ＮＣＢＰ含有与Ｃａ２＋浓度相关的特殊的结构和功能。另外,高浓度下Ｔｂ３＋的结合引发ＮＣＢＰ的分子间聚合,提示对稀土元素的使用要慎重     

钙调素对超氧化物歧化酶及乳酸脱氢酶的激活作用

<正> 钙调素(Calmodulin,CaM)是一种分布最广,功能最重要的钙结合蛋白,对钙离子具有高度的特异性及很高的亲合力。CaM结构保守,生理功能稳定,在细胞内做为钙离子的受体蛋白,调节许多依赖钙离子的生理活动。CaM是一种多功能调节蛋白,现已发现有三十多种重要的酶及生理过程是由CaM调节的。超氧化物歧化酶(SOD)和乳酸脱氢酶     

大熊猫子宫钙调素的分离纯化和性质的研究

以大熊猫子宫为材料分离纯化了钙调素(Calmodulin,CaM),经SDS-PAGE,PAGE和等电聚焦电泳鉴定,表现均一。分子量为18800道尔顿,等电点为3.6。该蛋白质分子的N-末端为封闭的。大熊猫子宫钙调素具有其它来源钙调素所特有的一些性质。对环核苷酸磷酸二酯酶有明显的激活作用,还发现对超氧化物歧化酶也有一定的激活作用。电泳行为受Ca~(2+)影响而出现特征性电泳改变,在含有Ca~(2+)的SDS凝胶电泳中,电泳速度比EGTA存在对略快,在PAGE中,有Ca~(2+)比无Ca~(2+)对电泳速度略慢。大熊猫子宫钙调素的氨基酸组成中,Phe/Tyr为8:2,可观察到钙调素特征性紫外吸收光谱。     

丙酮酸氧化酶激活机制的研究——α-肽与磷脂囊的结合

 丙酮酸氧化酶既能被两性脂类激活,也能被蛋白酶从羧基端切下一个23肽(称α-肽)激活,而且这两种激活方式相互排斥。本文用分离纯化的α-肽,通过测定色氨酸荧光能量转移的方法,证明α-肽能与磷脂囊(vesicle)结合。我们选用两种不同类型的荧光探针,发现α-肽对它们表现不同的色氨酸能量转移效率。α-肽对Dan-syl-DPPE为7.4±1.0％对Dansyl-UAPC为12.5±2.0％。由此推测α-肽的色氨酸残基易与磷脂双层内部疏水区结合,说明α-肽是一种较为疏水的肽。我们推测α-肽在这种外膜酶的激活过程中,提供了与膜结合的部位,在生理过程中起着重要作用。     

表面电荷突变与胰蛋白酶底物专一性的改造

分别利用酶切重组和“３＋１”引物ＰＣＲ定点突变的方法构建了三个胰蛋白酶表面电荷双突变体;Ｒ６２Ｄ＋Ｋ９７Ｅ,Ｒ６２Ｄ＋Ｋ１７５Ｅ和Ｋ９７Ｅ＋Ｋ１７５Ｅ。对三在Ｅ．ｃｌｏｉＸ９０菌中的表达产物进行了动力学测定,分别得到了三种双突变体在两种ｐＨ条件下,水解ＴＡＭＥ,ＴＬＭＥ两种底物的动力学数据。     

大熊猫脑钙调素的纯化及性质研究

以大熊猫脑为材料,经提取、热处理、Phenyl-Sepharose CL-4B疏水柱和快速液相分子筛层析,分离纯化得到CaM.经SDS-PAGE、 PAGE和IEF鉴定,得到的CaM为一条带.经测定,大熊猫脑CaM的分子质量为19 ku,等电点为3.8.酶活性实验表明大熊猫脑CaM对牛心磷酸二酯酶有激活作用.氨基酸组成分析结果与其他来源CaM相近.