甘蔗鞭孢堆黑粉菌原生质体转化DNA双片段的基因敲除方法的建立

由甘蔗鞭孢堆黑粉菌Sporisorium scitamineum引起的甘蔗黑穗病是甘蔗生产的主要病害,严重影响了甘蔗的产量和品质,然而其分子致病机制报道很少,极大地影响了有效防控技术的开发。为了提高该病菌基因功能的研究效率,本研究以甘蔗鞭孢堆黑粉菌有性配合两个关键基因SsGPA3和SsPRF1为目标,建立了基于DNA双片段的甘蔗鞭孢堆黑粉菌原生质体转化基因敲除技术体系。结果表明甘蔗鞭孢堆黑粉菌单倍体细胞生长期在OD₆₀₀约为0.7,28℃下10mg/mL细胞壁裂解酶作用30min获得的原生质体产率最高,再生率最优;使用线性DNA双片段转化获得阳性转化子的成功率达90%以上,显著高于线性DNA单片段和质粒。本方法的建立将极大地提高甘蔗鞭孢堆黑粉菌的基因敲除效率,同时也为其他真菌的基因敲除提供借鉴。     

EV71感染BABL/c乳鼠模型构建

目的 构建中重症EV71型手足口病的BABL/c乳鼠模型。方法 1日龄BALB/c乳鼠连续3 d腹腔注射EV71病毒液，监测小鼠体质量、生存率和临床疾病评分；采用HE染色检测脑、肺和骨骼肌组织病理变化；光镜下观察感染乳鼠脑、肺和骨骼肌组织匀浆作用RD细胞的细胞病变反应；采用蛋白质免疫印迹和免疫荧光法检测VP1和3D蛋白水平。结果 与正常对照组相比，EV71感染乳鼠体质量从第3天开始下降，2组比较差异有统计学意义（t=8.421 0,P<0.05）；生存率随感染时间延长逐渐下降；疾病评分显著增加；脑、肺及骨骼肌组织中VP1和3D蛋白表达与正常对照组比较显著升高（脑组织：t=6.355 7、3.423 2，肺组织：t=14.864 8、4.469 0，骨骼肌：t=7.908 5、4.923 7，均P<0.01）。结论 成功构建了中重症EV71型手足口病BALB/c乳鼠模型。