小檗碱通过抑制经典的NLRP3炎症小体活化通路来下调LPS诱导的HUVEC炎症反应*

目的:探讨小檗碱(Berberine, Ber)对脂多糖(Lipopolysaccharide, LPS)诱导的人脐静脉血管内皮细胞(Human Umbilical VeinEndothelial Cells, HUVEC)炎症反应的抑制作用及相关机制。方法:MTT法检测不同浓度的Ber对HUVEC存活率的影响。以0.05μg/mL LPS刺激HUVEC建立炎症反应模型,并分别给予1.25、2.5、5μM Ber干预,Elisa检测Ber对炎症因子TNF-α、IL-1β分泌的影响,免疫印迹法检测Ber对NLRP3炎症小体信号通路中NLRP3、My D88、IL-1β、TLR4、ASC和Caspase-1蛋白表达的影响。结果:不同浓度的Ber对HUVEC增殖均具有抑制作用,且基本呈现浓度梯度,IC50值接近5μM;与LPS组相比,不同浓度Ber(1.25、2.5、5μM)均可以显著下调HUVEC中TNF-α、IL-1β炎症因子的分泌(P0.005及P0.01),并可以显著抑制细胞中NLRP3、My D88、IL-1β、TLR4、ASC和Caspase-1蛋白的表达(P0.05),其抑制作用基本呈剂量关系,以5μM Ber的抑制效果最佳。结论:Ber可以通过抑制经典的NLRP3炎症小体活化通路来下调LPS诱导的HUVEC炎症反应。     

vMIP-Ⅰ激活Jurkat细胞抗-HIV基因表达的研究

本研究通过构建真核表达载体pEGFP-N3-vMIP-Ⅰ,电穿孔法将其转染至Jurkat细胞,荧光定量PCR检测vMIP-Ⅰ基因对Jurkat细胞内CCL5、APOBEC3G、APOBEC3F、等抗-HIV基因表达水平的影响,从而探讨vMIP-Ⅰ抗HIV感染的机制。结果显示:成功构建了pEGFP-N3-vMIP-Ⅰ载体,电穿孔转染效率达到40%左右,与转染空载体组相比,vMIP-Ⅰ转染组的Jurkat细胞内CCL5、A3G、A3F和MX1分别上调7.37倍、1.58倍、2.42倍和2.06倍。研究结果表明:vMIP-Ⅰ基因可激活Jurkat细胞内一些抗HIV相关基因的表达,这可能是vMIP-Ⅰ基因抗HIV感染的机制之一。     

miRNA与卡波氏肉瘤

microRNA(miRNA)是一类长度约为21～25个核苷酸RNA,它在转录后水平调节靶基因表达.miRNA在物种进化中相当保守,其表达有组织特异性和时序特异性,其主要功能是负调控基因表达.有研究表明,miRNA在发育、细胞增殖、凋亡、脂类代谢、激素分泌及肿瘤发生等多种生理和病理过程中密切相关.本文着重介绍miRNA的产生,作用机制,与肿瘤的关系,以及在卡波氏肉瘤中的研究进展.     

vFLIP激活Jurkat细胞表达HIV抑制因子的研究

目的:检测KSHV编码的vFLIP蛋白对Jurkat细胞HIV抑制因子表达的影响。方法:本研究首先构建真核表达载体pIRES2-EGFP-vFLIP,再将其电穿孔至Jurkat细胞,然后使用实时荧光定量PCR技术检测Jurkat细胞中A3G、A3F、CCL5等HIV抑制因子的表达水平,从而探讨vFLIP抗HIV/AIDS的作用及机制。结果:成功构建了真核表达载体pIRES2-EGFP-vFLIP,电转染效率达到40%左右。与对照载体转染组相比,vFLIP转染组内Jurkat细胞中CCL5、A3G、A3F及Mx2基因的表达分别上调了6.71、2.20、1.52及14.47倍。结论:vFLIP蛋白可以激活Jurkat细胞内某些HIV抑制因子的表达,提示其具有一定的抗HIV/AIDS作用。     

卡波氏肉瘤相关病毒感染激活Jurkat细胞抗-HIV基因表达的研究

目的:观察Jurkat细胞感染卡波氏肉瘤相关病毒(Kaposi's sarcoma-associated herpes virus,KSHV)后细胞内几条主要的抗HIV作用的基因(RANTES、APOBEC3G、APOBEC3F、MX1、MX2)表达情况。方法:首先用佛波酯(TPA)(20ng/ml)刺激BCBL-1细胞72小时,提取KSHV病毒滤液。然后把含KSHV滤液的RPMI-1640培养Jurkat细胞。24小时后,分别在感染后第3、5天收集细胞,提取细胞总RNA,通过实时定量PCR检测分析相关基因的表达情况。结果:通过对KSHV感染不同时期的细胞抗-HIV基因表达分析,结果显示:与未感染组相比,KSHV感染组的Jurkat细胞内的多条抗HIV-1基因表达上调。感染第3天,RANTES上调123倍,APOBEC3G上调3.12倍,A POBEC3F上调1.18倍,MIX1上调2.75倍,MIX2上调4.35倍,感染第5天RANTES上调11.91倍,MX1上调2.72倍,MIX2上调2.22倍。结论:KSHV感染在一定程度上激活Jurkat细胞抗HIV相关基因的表达。