双委夜蛾气味结合蛋白AdisOBP6的原核表达抗体制备及表达谱分析

【目的】本研究旨在对双委夜蛾Athetis dissimilis气味结合蛋白OBP6进行原核表达、抗体制备以及表达谱分析,便于今后对AdisOBP6功能展开研究。【方法】利用生物信息学软件分析AdisOBP6蛋白结构特征;利用通过原核表达获得的重组蛋白4次免疫新西兰大白兔,制备AdisOBP6抗体;采用荧光定量PCR和Western blot技术检测AdisOBP6在双委夜蛾雌雄成虫触角、不同时期精巢以及受精卵和未受精卵中的表达情况。【结果】同源建模预测显示,AdisOBP6具有6个保守半胱氨酸残基和7个α-螺旋结构,并 折叠成一个结合口袋。原核表达结果显示,在20℃下0.5 mmol/L IPTG诱导重组蛋白表达量最多、最稳定。4次免疫重复中,抗体效价分别超过1∶512 000, 1∶512 000, 1∶512 000和1∶64 000。Westernblot检测获得的抗体与AdisOBP6蛋白能够特异性结合。荧光定量PCR结果显示,AdisOBP6在双委夜蛾精巢中的表达量远高于在触角中的,在幼虫期精巢中AdisOBP6就已经开始表达,在蛹期精巢中表达量低于在幼虫期的, 成虫羽化后精巢中的表达量逐渐进入高峰,在未受精卵和受精卵中几乎不表达或表达量极低。Western blot分析发现,AdisOBP6蛋白也主要在精巢中表达,在雌雄成虫触角、受精卵和未受精卵中表达量很低。【结论】本研究实现了AdisOBP6的原核表达,成功地制备了抗体;并证实AdisOBP6在双委夜蛾精巢中大量表达,成虫羽化后表达量达到高峰,推测AdisOBP6可能参与了授精过程。本研究结果为今后进一步研究AdisOBP6的功能奠定了基础。     

绢蒿属8种植物果实微形态特征及其分类学意义

为寻找绢蒿属系统学的新证据,应用解剖镜和扫描电镜对我国8种绢蒿属植物的果实微形态特征进行了比较观察。结果表明,绢蒿属8种植物果实形状相似性较高,呈倒卵形或长倒卵形,直或稍弯曲;果脐圆形,常偏向一侧;顶端中央均可见花柱残留物,边缘具衣领状环;果实表面纹饰为搓板状和不规则皱褶纹饰。这些果实微形态特征中,果实的表面纹饰具有一定的差异,特别是次级结构,可作为绢蒿属植物区分种的参考性状之一。     

棉铃虫齿唇姬蜂嗅觉受体基因 CchlOrco 的克隆及组织表达谱分析

【目的】昆虫的嗅觉受体（olfactory receptors, ORs）一般以气味分子特异的ORs与共受体（ co-Receptor, Orco）通过形成异质二聚体在嗅觉感受中发挥关键作用,其中Orco由于具有序列的保守性而受到广泛的重视。本研究旨在克隆棉铃虫齿唇姬蜂 Campoletis chlorideae 的Orco基因,并对其组织表达谱进行分析。【方法】利用RT-PCR技术和转录组分析技术克隆棉铃虫齿唇姬蜂的Orco基因,并对其编码的氨基酸序列进行生物信息学分析;利用Real-time PCR技术对该基因在该蜂成虫不同组织中的表达量进行分析。【结果】获得了棉铃虫齿唇姬蜂 Orco 的全长cDNA序列,命名为 CchlOrco（GenBank登录号：KP255444）。序列分析表明, 该基因开放阅读框全长1 437 bp,编码478个氨基酸,预测该氨基酸序列具有7个跨膜区。CchlOrco 主要在成虫触角中表达,且在雄蜂触角中的表达量最高,是雌蜂触角中表达量的8.0倍,而在其他组织中表达量极低。【结论】本研究克隆了棉铃虫齿唇姬蜂 CchlOrco 序列全长,明确了其在成虫不同组织中的表达水平,为进一步研究该基因及其他嗅觉受体基因功能奠定了基础。     

四种金龟成虫触角的板形感器和腔锥形感器形态对比

板形感器(placodea sensilla)和腔锥形感器(coeloconica sensilla)是金龟子类害虫最重要的两种嗅感器.本文运用扫描电子显微镜分别对铜绿丽金龟Anomala corpulenta Motschulsky、华北大黑鳃金龟Holotrichia oblita Fald.、棕色鳃金龟Holotrichia titanis Reitter和暗黑鳃金龟Holotrichia parallela Motschulsky的雌雄成虫触角的板形感器和腔锥形感器进行了对比观察.结果表明,四种金龟成虫触角的板形感器和腔锥形感器形态既有相似性,但也存在显著差异,表现出较高的形态多样性,如铜绿丽金龟板形感器表面特化形成龟纹、华北大黑鳃金龟的梭形腔锥形感器等.研究结果丰富了四种金龟的比较形态学理论,也为金龟子的系统分类学研究积累了资料.     

锤胁跷蝽触角转录组分析

为了获得锤胁跷蝽(Yemma signatus Hsiao)触角基因信息,本研究使用Illumina HiSeq TM 4 000高通量测序技术对锤胁跷蝽成虫触角进行转录组测序和生物学信息分析。共获得61 080 938条clean reads,包括9.16 G (GenBank登录号:SRR3348966)。拼接115 491条unigenes,平均长度为578 bp,N50为863 bp。在7大数据库中注释到46 224条unigenes,其中在NR数据库中注释的基因最多,为32 842 (28.43%)条,与内华达古白蚁(Zootermopsis nevadensis)相似度最高(9.0%)。转录组数据分析鉴定出125个与嗅觉相关的基因,其中66个嗅觉受体、11个味觉受体、1个离子型受体、3个感觉神经元膜蛋白、30个气味结合蛋白和14个化学感受蛋白基因。本研究首次获得锤胁跷蝽触角转录组数据,并鉴定出嗅觉相关基因,本研究为今后利用嗅觉基因靶标防治害虫提供了分子生物学信息数据。     

菌株CZZX16的多相分类鉴定及其紫外线诱变选育

以多年生凤丹牡丹营养器官为材料,通过以糯米粉和普鲁兰糖为唯一碳源的初筛分离培养和鉴别培养,获得一株具有产普鲁兰酶活性菌株,将其编号为CZZX16。采用DNS法对菌株CZZX16的初始产普鲁兰糖活性进行了初步评估,37℃发酵培养30 h时酶活性最高达到2.3 U/m L,因而确定CZZX16具有产普鲁兰酶活性。综合目标菌株的显微观察特征、生化测定特征和16S r RNA序列的克隆分析结果,对菌株CZZX16进行了多相分类鉴定,将其确定为克雷伯氏菌属一种Klebsiella sp.,暂命名为Klebsiella sp.CZZX16。为挖掘菌株CZZX16的产普鲁兰酶活性潜力,对其进行了紫外线诱变选育,筛选得到产酶活性较高的突变株CZZX16-2,37℃发酵培养30 h时其产酶活性最高达到7.8 U/m L,是出发菌株CZZX16的2.21倍。因此,CZZX16可作为产油牡丹专用菌肥开发的良好备选菌株。     

银纹夜蛾幼虫气门形态特征的扫描电镜观察

采用扫描电子显微镜对银纹夜蛾Argyrogramma agnata Staudinger 5龄幼虫气门的细微结构进行观察。结果表明,银纹夜蛾的幼虫气门的外面观呈二唇状,二唇瓣的内侧向外微凸,唇瓣由若干密生的簇生分枝结构(筛板)组成,在2000倍镜下,筛板呈较规则的刺猬状,在17000倍镜下,簇生分枝圆柱状,柱体光滑,顶端钝圆;筛板的内面观呈平行排列的树形结构,分枝长刺状,单生,分枝数量明显减少。气门外围体壁具有尖塔形纹饰。银纹夜蛾气门的超微结构特征是其长期适应和进化的结果,除具有其本身的生理学意义外,也可作为系统分类的参考依据。     

双委夜蛾感觉神经元膜蛋白编码基因鉴定及组织表达谱分析

昆虫感觉神经元膜蛋白(SNMP)是至关重要的次要嗅觉蛋白,能够作为信息素识别的标记.本研究利用荧光定量PCR方法首次克隆和鉴定了双委夜蛾Athetis dissimilis的2个SNMP基因,并命名为AdisSNMP1和AdisS-NMP2.序列分析表明,AdisSNMP1编码区开放阅读框长1 572 bp,编码523...     

锤胁跷蝽YsigOrco基因的克隆、鉴定与表达

昆虫对气味的识别需要专门的嗅觉受体ORs,而嗅觉受体需要与一个保守的非典型嗅觉受体Orco结合成异源杂合体才能起嗅觉作用。有关Orco的同源基因在其它种昆虫中已经被鉴定出来。本研究通过对前期锤胁跷蝽触角转录组数据分析和RT-PCR,也鉴定出了一个Orco基因,并通过q RT-PCR对该基因的组织表达谱进行分析。结果表明,锤胁跷蝽Orco基因ORF全长1 425 bp,编码474个氨基酸残基,包含7个跨膜区,其中C端在膜外,N端在膜内;氨基酸序列对比发现,该基因与其它昆虫Orco同源基因相似度较高,因此,将该基因命名为Ysig Orco(基因登录号:KY883444);实时荧光定量PCR分析显示,Ysig Orco在锤胁跷蝽的雌虫和雄虫触角中表达量较高,但二者之间差异不显著,在胸部、足和喙等不同组织中有少量表达。     

四种粉虱种群超微形态特征多样性研究

运用扫描电子显微镜对烟粉虱Bemisia tabaci、非洲伯粉虱Bemisia afer、温室粉虱Trialeurodes vaporariorum和柑桔粉虱Dialeurodes citri4种粉虱4龄若虫的超微形态特征进行了初步研究。结果表明,扫描电子显微镜下的超微结构特征可很好地将4种粉虱区分开来,如烟粉虱圆锥状的舌状突,非洲伯粉虱尾沟两侧隆起上形成的横脊,温室粉虱形态典型的乳突和泌蜡孔,柑桔粉虱近圆形的皿状孔及其尾沟内的卵石状乳突等特异特征。并根据种间的超微结构特异特征,编制了不同种的简明检索表。超微形态特征为粉虱种群鉴定提供了可靠的理论参考。