内含肽介导的蛋白连接技术及其应用

内含肽介导的蛋白质剪接是一种自发的翻译后事件,内含肽可介导其自身从前体蛋白上切除,同时将其两侧的外显肽连接起来.在过去10多年中,基于蛋白质剪接原理发展出的蛋白连接技术被广泛的用于蛋白质工程的研究中.这些技术打破了化学合成方法中对目标物大小的限制,有助于化学和生物学的研究.针对近年由蛋白质连接演化出来的新技术及其应用做简要的阐述.     

剪切力诱导微血管内皮细胞K~+通道的开放

利用膜片针及内皮细胞流动小室方法对大鼠脑微血管内皮细胞在剪切力作用下内上细胞壁Ｋ＾＋通道的开放进行了初步研究。结果提示脑微务人皮细胞膜上存在剪切力敏感的Ｔ＾＋通道,剪切方作用后,内皮丰Ｋ＾＋电流明显增大,此电流有明显的短智延迟现象也可以被胞外施抑制,符合ＩＫＶ特征。流动剪切力可以影响内皮细胞膜上的Ｋ＾＋通道的开放引身 离子通透性的增加,进而引起细胞内Ｃａ６２＋的变化,在Ｋ＾＋、Ｃａ＾２＋等离子浓度     

FAM92A1-289基因的真核表达载体构建和亚细胞定位

利用PCR方法扩增FAM92A1-289全长,经BamH I和Xho I酶切后连接入pEGFP-N1真核表达载体,构建pEGFP-N1-FAM92A1-289重组表达质粒,转染Hela细胞,利用荧光显微镜观察FAM92A1-289在细胞中的定位。经双酶切和核酸序列分析证实重组质粒包含有正确编码的FAM92A1-289读码框。荧光显微镜观察到空质粒pEGFP-N1转染后,整个细胞内弥散绿色荧光,而转染pEGFP-N1-FAM92A1-289重组载体后,可见绿色荧光分布于Hela细胞核中,显示FAM92A1-289定位于细胞核。成功构建人FAM92A1-289真核表达载体,FAM92A1-289定位于哺乳细胞的细胞核中。     

炭疽病:微生物学的一个老问题带来了新烦恼

炭疽病是由炭疽芽孢杆菌的芽孢通过皮肤、胃肠道及肺部侵入人体而造成的。芽孢在体内被巨噬细胞吞噬后萌发并繁殖。带有荚膜的炭疽芽孢杆菌进入血液并释放3种外毒素。外毒素侵入宿主细胞造成患者代谢紊乱而休克致死。根据国外有关炭疽病的最新报道,对炭疽芽孢杆菌的微生物学及炭疽病的发病机理进行了综述。     

熟制鱿鱼块微波杀菌过程的数值模拟研究

为研究熟制鱿鱼块在微波杀菌过程中的温度变化和微生物灭活情况,文章采用有限元分析软件COMSOL Multiphysics构建传热-电磁双向耦合模型,对微生物热失活方程进行积分,并采用有限元方法进行数值模拟,最后与实验结果进行比较。结果显示微波杀菌过程中温度变化和微生物灭活情况与实验结果总体接近,表面温度低于中心温度,相差8℃～10℃。在温度保持阶段两者差异稳定,微生物的灭活情况与温度分布相对应,关键原因就是电场分布的不均匀和食品表面热对流现象。熟制鱿鱼块中心点温度模拟值和微生物灭活数据与实验数据的均方根误差分别为1.19和0.31。文章证实了使用COMSOL Multiphysics建立的数值模型能很好地模拟微波热杀菌的过程。     

剪切力诱导微血管内皮细胞K~ 通道的开放

利用膜片钳及内皮细胞流动小室方法对大鼠脑微血管内皮细胞在剪切力作用下内皮细胞膜K 通道的开放进行了初步研究 ,结果提示脑微血管内皮细胞膜上存在剪切力敏感的K 通道 ,剪切力作用后 ,内皮细胞膜上K 电流明显增大 ,此电流有明显的短暂延迟现象 ,也可以被胞外施加的TEA抑制 ,符合IKv特征。流动剪切力可以通过影响内皮细胞膜上的K 通道的开放引起穿细胞的离子通透性的增加 ,进而引起细胞内Ca2 的变化。在K 、Ca2 等离子浓度改变的诱导下可以促使G -Actin装配为F -Actin。同时诱导内皮细胞内钙库调节机制的激活 ,这些变化都可以进一步引起细胞信号转导机制的激活。该工作为进一步开展剪切力对微血管内皮细胞信号转导机制的影响提供了实验数据。     

血清CA72-4、CA199对结直肠癌的诊断价值及与肿瘤进展的关系研究

摘要 目的：探讨血清糖类抗原72-4（CA72-4）、糖类抗原199（CA199）对结直肠癌的诊断价值及与肿瘤进展的关系。方法：选取2016年7月到2018年7月期间在我院接受治疗的结直肠癌患者60例作为结直肠癌组,另选取同期在我院接受治疗的结直肠良性病变患者40例作为良性病变组,比较结直肠癌组、良性病变组血清CA72-4、CA199的水平,比较不同TNM分期、不同分化程度的结直肠癌患者血清CA72-4、CA199的水平,以病理诊断为金标准,分析血清CA72-4、CA199对结直肠癌的诊断价值。结果：结直肠癌组的血清CA72-4、CA199水平高于良性病变组（P<0.05）。TNM分期为III-IV期的结直肠癌患者的血清CA72-4、CA199水平高于I-II期的患者（P<0.05）,分化程度为低分化的结直肠癌患者的血清CA72-4、CA199水平高于中高分化的患者（P<0.05）。CA72-4联合CA199检测对结直肠癌的灵敏度高于CA72-4、CA199单独检测。结论：CA72-4与CA199联合检测对结直肠癌具有较高的诊断价值,且两指标的水平与结直肠癌的分化程度和TNM分期有关,可在一定程度上反映肿瘤进展情况。     

GA_3和6-BA混合处理对葡萄果穗致畸的发育解剖学研究

采用不同含量GA_3+6-BA激素于葡萄开花前和盛花期喷施'全球红'葡萄果穗,并对激素处理和对照不同时期果穗的解剖学结构特征进行比较分析,以探讨外源激素对葡萄果穗的致畸原因.结果表明:(1)不同含量激素均可使葡萄穗轴弯曲、硬化,果粒僵化并出现大小粒现象,果穗着色晚、成熟期推迟,其中30 mg/kg GA_3+10 mg/kg 6-BA处理最为严重.(2)解剖学观察发现,处理30 mg/kg GA_3+10 mg/kg 6-BA较对照在一定程度上促进了果穗细胞的分裂和分化,致皮层、髓腔以及果粒果皮等不同组织细胞变形,促使皮层细胞数量增加和细胞的不均匀变化以及髓腔变形.(3)GA_3+6-BA处理促进了其维管柱组织的次生生长和木栓化细胞的增加.(4)葡萄果穗畸变主要集中发生于果穗生长发育的中后期,即花后20 d至花后40 d.     

剪切力诱导微血管内皮细胞c-fos蛋白的表达

利用内皮细胞流动小室方法对大鼠脑微血管内皮细胞在剪切力作用下细胞核内原癌基因ｃ－ｆｏｓ蛋白的翻译水平的表达进行了初步研究,结果提示脑微血管内皮细胞在切力作用下,ｃ－ｆｏｓ蛋白有明显的表达且显示了剪切力水平的非依赖性和作用时间的依赖性。流动剪切力诱导的ｃ－ｆｏｓ的适度表达可以导致内皮细胞伸展,细胞骨架蛋白合成,细胞骨架重排等,以适应流动剪切力的作用 。但过度的剪切力作用可以引起内皮细胞皱缩,损伤,脱     

鸡3种组织中热应激相关基因的表达谱芯片分析

文章以8日龄矮小型黄羽肉雏鸡为材料,以28℃±1℃处理3 h为对照组,40℃±1℃热应激3 h为实验组,采集大脑、肝脏、腿肌3种组织,利用全基因组表达谱芯片检测实验组和对照组各组织的差异表达基因,并结合生物信息学方法分析其功能。研究结果表明：在热应激处理组与对照组中,大脑组织中共有183个显著变化的差异表达探针(变化倍数≥2或≤0.5,q≤0.05),129个有基因注释,39个生物学过程发生了改变,18个生物学通路发生显著改变;肝脏组织中有558个显著改变的探针(变化倍数≥2或≤0.5,q≤0.05),包含339个基因,涉及37个生物学过程,58个生物学通路发生改变;腿肌组织中显著改变的探针有301个(变化倍数≥2或≤0.5,q≤0.05),209个有基因注释,参与了31个生物学过程,51个生物学通路发生改变。3种组织中,获得差异表达探针935个,不同组织具有特异性的表达模式;多种热休克蛋白家族基因被诱导上调表达,抗凋亡过程、钙离子信号通路、MAPK信号通路和多种代谢途径发生改变。文章对鸡的热应激分子机制进行了初步探索,为筛选耐热性相关基因提供了理论依据。