海产品中副溶血性弧菌的分离、鉴定及与临床分离株的生化性状比较

利用TCBS和科玛嘉两种选择性培养基从60份海产品中初筛得到27株疑似副溶血性弧菌,经生化鉴定,27株均为副溶血性弧菌,其中22株是从鲜活海产品中分离得到,5株从冷冻海产品中分离得到.进一步与临床上得到的32株副溶血性弧菌进行了四个特殊生化试验的比较,结果发现副溶血性弧茵临床分离株与海产品分离株在溶血、脲酶及枸橼酸盐利用3个生化试验上存在差异,而阿拉伯糖利用试验无差异,这为根据生化性状研究不同来源副溶血性弧菌提供基础.     

原核表达载体pET28a-EGFP的构建与表达

以质粒PEGFP-N3中增强型绿色荧光蛋白（Enhanced Green Fluorescent Protein,EGFP）基因片段为模板,利用PCR技术扩增得到EGFP基因片段,并设计引物在其2端引入酶切位点EcoRⅠ和HindⅢ,对引入酶切位点的EGFP片段和pET28a质粒进行双酶切处理后,利用T4连接酶连接得到了重组质粒pET28a-EGFP。利用热击法把得到的重组质粒pET28a-EGFP转化至E.coliBL21（Escherichia coliBL21）感受态细胞中,当大肠埃希菌LB（Luria-Bertani）培养液在600 nm下的光密度值OD600=0.4时,通过添加异丙基硫代β-D-半乳糖苷（IPTG）作为诱导剂诱导EGFP表达。结果表明：重组质粒酶切鉴定及测序结果正确。在自然光下,转化子在LB固体培养基（含1 mmol/L的IPTG和50μg/mL的卡那霉素（Kan））中菌落呈绿色。在荧光显微镜下受蓝光激发,可以清楚观察到发绿色荧光的转化子。成功构建的原核表达载体pET28a-EGFP在E.coliBL21中得到了高效表达,为以后作为荧光标记物标记食源性病原菌提供了一定的理论和技术支持。     

响应面分析法优化副溶血性弧菌生长条件

通过单因素分析, 确定最适于副溶血性弧菌VPJ33生长的pH、温度和盐度。在此基础上, 综合考虑3个因素对VPJ33生长的影响, 用Design-Expert软件进行响应面分析, 优化VPJ33的培养条件得到了菌体生长模型, 以及取得模型最优值时各因素的水平。结果表明, VPJ33的最优培养条件为：pH 8.41、温度34.1℃和盐度2.47％; 菌体生长过程中, pH和盐度以及pH和温度对VPJ33生长的交互作用显著, 盐度和温度对VPJ33生长的交互作用不显著。菌体生长模型达到显著水平, 可以对VPJ33在不同条件下的生长情况进行分析和预测。     

海水及海产品中溶藻弧菌的分离与鉴定

从上海东海海域随机采集海水样品50份及各市场购买海产品95份,参照国标中副溶血性弧菌的检验方法,对采集样品进行了分离与鉴定。样品增菌后选用TCBS及科玛嘉弧菌显色培养对其进行初步分离,挑取可疑单菌落进行生理生化验证和分子生物学方法鉴定,其中从9份海水、24份海产品中分离出溶藻弧菌菌株,分离率分别为18.0%与25.3%。     

海产品中副溶血性弧菌的分离、鉴定及与临床分离株的生化性状比较

利用TCBS和科玛嘉两种选择性培养基从60份海产品中初筛得到27株疑似副溶血性弧菌, 经生化鉴定, 27株均为副溶血性弧菌, 其中22株是从鲜活海产品中分离得到, 5株从冷冻海产品中分离得到。进一步与临床上得到的32株副溶血性弧菌进行了四个特殊生化试验的比较, 结果发现副溶血性弧菌临床分离株与海产品分离株在溶血、脲酶及枸橼酸盐利用3个生化试验上存在差异, 而阿拉伯糖利用试验无差异, 这为根据生化性状研究不同来源副溶血性弧菌提供基础。     

响应面分析法优化副溶血性弧菌生长条件

通过单因素分析,确定最适于副溶血性弧菌VPJ33生长的pH、温度和盐度.在此基础上,综合考虑3个因素对VPJ33生长的影响,用Design-Expert软件进行响应面分析,优化VPJ33的培养条件得到了菌体生长模型,以及取得模型最优值时各因素的水平.结果表明,VPJ33的最优培养条件为:pH 8.41、温度34.1℃和盐度2.47%;菌体生长过程中,pH和盐度以及pH和温度对VPJ33生长的交互作用显著,盐度和温度对VPJ33生长的交互作用不显著.菌体生长模型达到显著水平,可以对VPJ33在不同条件下的生长情况进行分析和预测.     

复合乳酸菌对冷藏海鲈鱼块的保鲜效果

【目的】研究复合乳酸菌对冷藏海鲈鱼块的保鲜效果。【方法】以冷藏海鲈鱼块为对象,筛选出3株能够明显抑制其优势腐败菌(草莓假单胞菌Pseudomonas fragi,腐败希瓦氏菌Shewanella putrefacens)生长的单一乳酸菌,同时也筛选出对其优势腐败菌具有最显著抑制效果的一组复合乳酸菌,再将该复合乳酸菌接种到海鲈鱼块上,在4°C冷藏过程中,通过感官评定、挥发性盐基氮(TVB-N值)的测定和优势腐败菌的计数来评价复合乳酸菌对冷藏海鲈鱼块的保鲜效果。【结果】单一乳酸菌(干酪乳杆菌LC1、植物乳杆菌LP1和乳酸菌L3)对2株冷藏海鲈鱼优势腐败菌的抑制效果明显;复合乳酸菌(干酪乳杆菌LC1+植物乳杆菌LP1+乳酸菌L3)的抑菌效果最为显著;在4°C冷藏过程中,复合乳酸菌能使冷藏海鲈鱼块发生感官变化延缓6 d、使TVB-N值的升高延缓2 d,同时显著抑制优势腐败菌的生长。【结论】复合乳酸菌对冷藏海鲈鱼块具有良好的保鲜作用,能有效延长其货架期。     

副溶血性弧菌的致病性及其快速检测

副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)是革兰阴性嗜盐性细菌,隶属弧菌科中的弧菌属,它是一种人畜共患病菌[1].     

具抑菌活性海洋微生物的筛选

从上海郊区海域采集的海水、海泥样中分离出193株海洋细菌,对其进行抑菌活性菌株的筛选。对分离出的菌株分别利用琼脂块法和管碟法进行初筛和复筛,结果显示有29株海洋细菌具有抑菌活性,占总分离菌株的15%,其中抑菌能力较强的G4抑菌谱较广,同时能抑制革兰氏阳性和阴性指示菌。