电诱导酵母属与短梗霉属属间融合的研究

本文报道了经GH一401 型电诱导细胞融合、基因转移仪诱导实现的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae NK491) 与出芽短梗霉 (Aureobasidium pullulans NKB93—0061eu)的原生质体电诱导融合。在融合小罐中用3个强度为11 Kv／cm,时程为10μs的高压电脉冲处理原生质体,获得的融合子营养互补的融合频率为5.8×10^-5。在选择培养基上连续传代10次,然后在完全培养基上传代20次,最终得到4株稳定的融台子。融合子的细胞形态、大小、核的DNA含量以及酒精发酵等特性的观察和测定表明,4株融合子与双亲均有明显差异。实验结果表明,电诱导原生质体融台对酵母菌的属间融合是一种行之有效的方法,具有较高的融合频率。     

非放射性反相杂交法在HLA－DQA1位点基因分型中的应用

将遴选的经适当接尾的１２个ＨＬＡ－ＤＱＡ１序列特异性寡核苷酸固定在一张滤膜上,用生物素标记的ＤＱＡ１特异性扩增产物与滤膜上的序列特异性寡核苷酸在四甲基氯化铵杂交体系中杂交,然后经洗膜封膜,杂交信号用非放射性的碱性磷酸酶显色法检测,根据杂交斑点的显示结果分析标本的基因型。采用这种方法初步确定了ＨＬＡ－ＤＱＡ１位点８种单倍型等位基因：ＤＱＡ１０１０１、０１０２、０１０３、０２０１、０３０１１、０４０１、０５０１和０６０１．非放射性反相杂交法可对各种来源的杂合性标本进行ＨＬＡ－Ⅱ类基因快速分型,并适合在临床器官移植的组织分型配型、疾病易感性研究和法医鉴定等领城中应用。     

I型鸭肝炎病毒VP1、3D基因克隆及其在大肠杆菌中的表达

根据GenBank中的I型鸭肝炎病毒全基因序列设计了扩增I型鸭肝炎病毒VP1、3D基因的引物, 用该特异性表达引物从I型鸭肝炎病毒cDNA模板中扩增得到目的基因VP1、3D, 用相同的限制性内切酶酶切目的基因和表达载体pET32a后构建重组表达载体, 转化宿主BL21(DE3), 用不同浓度的IPTG诱导VP1、3D基因的表达, 收集菌液进行SDS-PAGE电泳, Western-blotting分析蛋白免疫原性。结果表明, VP1、3D在大肠杆菌中表达量较高, 表达产物的分子量约为48 kD、68 kD, 并能被兔抗DHV-1血清所识别。I型鸭肝炎病毒VP1、3D蛋白在大肠杆菌中表达产物具有免疫原性。     

人珠蛋白信使核糖核酸的制备及其体外翻译

本文以新生儿ABO血型不配溶血换得的血网织红细胞为材料,用酚-氯仿提取及Oligo(dT)纤维素亲和层析制备了人珠蛋白mRNA。并在变性条件下经琼脂糖凝胶电泳鉴定,证明它是9～10S的RNA。人珠蛋白mRNA在兔网织红细胞溶解物与麦胚体外翻译体系中的翻译活性与其浓度均有依赖关系。用SDS-聚丙烯酰胺凝胶不连续电泳及萤光显影鉴定了无细胞体系的翻译产物为人珠蛋白;并以醋酸纤维膜电泳分析了体外合成的人珠蛋白肽链组成,结果表明新生儿血中珠蛋白mRNA合成的α、β、γ珠蛋白肽链之比为3:1:2。     

枯草芽孢杆菌抗菌蛋白X98Ⅲ的纯化与性质

枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）BS－98是一株能强烈抑制苹果轮纹病菌（Physalosporapiricola）等植物病原真菌的拮抗菌株。BS－98菌株培养液经硫酸铵分级盐析、SephadexG－100柱层析和DEAE－纤维素（DE32）柱层析后分离纯化出一种抗菌蛋白,命名为X98Ⅲ。蛋白电泳分析结果表明,此蛋白分子量为59000,等电点为4．50．醋酸纤维膜电泳后经特异染色证明X98Ⅲ含糖及胀。用DNS法测其含糖量为6％。此蛋白对热稳定,对蛋白酶部分敏感。氨基酸组分分析表明,该蛋白含11种不同氨基酸,尤富含谷氨酸和半胱氨酸等,而缺少天冬氨酸等。纯化后的X98Ⅲ对苹果轮纹病菌、芦笋茎枯病菌等有很强的抑制作用。X98Ⅲ的抑菌机理主要是溶解细胞壁,造成菌丝畸形、孢子不发芽或发芽异常。     

卡那霉素产生菌Kp958-4菌株中与抗菌素产生有关的质粒转化

当把质粒消除株Ko42-7作为受体菌株,把产生卡那霉素产生菌Kp958-4作为供体菌株进行DNA转化时,获得了具有产生卡那霉素和形成孢子能力的转化子Ko-p77。Ko-p77与Kp958-4的抗菌谱和所用六种溶剂系统中的Rf值相似。这表明,S.kanamyceticus菌株间的质粒DNA可以进行转化。     

植物原生质体的游离和融合

通过原生质体融合进行体细胞杂交已或为研究植物遗传和育种的一个潜在新途径。在本报道中,我们描述了用酶法将小麦、大麦、玉米、红花和蚕豆等作物的叶片和根尖细胞游离成大量的完整的原生质体的方法。观察了在降低原生质体悬浮液的渗透浓度下,小麦、玉米及蚕豆的同源融合的过程。这种融合过程可在数分钟内完成。在上述植物中以小麦和玉米的同源融合率较高,分别达到15％和22％。还描述了获得诱发种间融合的方法。利用硝酸钠和降低渗透稳定剂浓度时,于蚕豆叶片和红花根尖的远缘种间原生质体间获得了融合体。诱发融合率达4％强。同时也观察到小麦叶片和红花根尖原生质体间的融合。     

铜绿假单胞菌AS1.860萘降解质粒的转化

为进一步证明铜绿假单胞菌AS1.860菌株降解萘能力与质粒的关系,我们以菌株AS1.860作供体菌,AS1.860-30(B-2~-)作受体菌进行转化。转化子BS1.860CI具备了供体株的遗传特性,转化频率为8×10~(-8)。琼脂糖凝胶电泳和酶切图谱观察,二者质粒DNA迁移区段和酶切图谱相同,表明质粒与萘的降解及铜绿色素的产生有关。