NanoString nCounter分析系统进行多基因表达计数的评价

目的:Nano String n Counter是近年发展起来的进行基因表达谱检测的新平台,它利用分子条形码直接对基因表达进行多重计数。本实验通过对m RNA表达量的检测,分析n Counter系统进行基因表达计数的可靠性。方法:应用Nano String公司提供的CAE Kit试剂盒,通过杂交(m RNA样品与报告探针和捕获探针杂交)、纯化(清洗未结合探针)和计数(读取m RNA的条数)三个步骤,检测由人参考RNA和人脑RNA构成的4个样品中48个目的基因的m RNA表达量;对获得的未进行标准化的原始数据,应用Excel 2007软件进行线性分析,从再现性、稳定性、准确性方面对n Counter分析系统进行评估。结果:再现性分析所有R2均大于0.998,线性拟合良好;试剂盒中阳性控制所有R2均大于0.99,高于质控要求的0.95;样品H70B30和H30B70的预期表达量与实测值线性R2大于0.999,预期值与实测值一致性良好。结论:n Counter分析系统稳定性好,准确性高,检测m RNA表达可靠。