Ti质粒T区tms基因的分离及其对高等植物分化的影响

根癌农杆菌Ti质粒的T区DNA带有致瘤基因,其基因1和基因2编码生长素吲哚乙酸生物合成途径中的两个酶。以pGV 354(pBR322质粒中插有Ti质粒C 58 T区DNA的HindⅢ15—HindⅢ22大片段)重组质粒出发,我们分离了基因1和基因2,并构建了带有卡那霉素抗性基因的重组质粒pBZ 692,通过基因载体pGV 3850,我们将基因1和基因2引入了高等植物。结果证明基因1和基因2能促使烟草、向日葵、土豆等转化组织分化长根,转化的根在MS_0培养基上能脱分化形成愈伤组织并自主生长,在转化的组织中有转化标记胭脂碱的存在。     

Insect-resistant transgenic cabbage plants and their progenies

An insecticidal crystal protein gene of Bacillus thuringiensis was transferred into cabbage genome with the method of Agrobacterium infection. Cotyledons with petioles as explants were cocultivated with Agrobacterial suspension. Calli generated at the basis of petiole were subjected to selection on the MS medium containing 15-30 mg/L kanamycin (Km). About 5% explants produced calli growing continuously on the selective medium. Green shoots appeared on these calli when they were transplanted onto medium with Km and 6-BA for plant differentiation. The shoots were separated and cultivated on medium with kanamycin. About 80% shoots were rooted. Non-transformed control calli could not give normal shoots and roots and brownized and died gradually. Larvae of Pieris rapae showed poisonous symptoms: growth inhibition and mortality when fed with the leaf of the transgenic plants. About 80% of regenerated plants showed positive hybridization bands when their DNA were probed with crystal protein sequence of Bacillu     

植物基因工程的研究概况

我们研究室曾收到许多读者来信,询问植物基因工程(或称遗传工程)的研究情况,因为问题比较复杂,无法用简短的书信方式阐述清楚,因此,我们将收集到的有关资料整理成文,供读者参考。近年来分子生物学的成就推动了DNA体外重组的研究,并导致基因工程这一新技     

简讯

三月二十八,上海市细胞学会与产生所联合举行子《植物基因工程》学术讨论会,来自本市高校和科研系统的百余人前来参加子会议。会议进行了一天,上午由薛中天和白永延二同志做了植物基因分离的研究近况和外源基因在植物细胞内表达的研究概况二个报告,下午由许智宏和王钧分别介绍了第一届国际植物分子生物学会议和西欧(英、法、比)植物分子生物学研究情况。报告综述了近年来国际上有关方面的研究动态。与会者认真听讲,积极提问,学术气氛活跃.会议并得到植生所后勤部门的支持,为外单位代表提供了方便。     

苏云金杆菌内毒素蛋白基因转入葡萄胚性愈伤组织细胞及转基因植株再生的研究

以葡萄的胚性愈伤组织作为农杆菌介导,Ti质粒转化材料,利用共培养法将苏云金杆菌内毒素蛋白基因转入葡萄胚性愈伤组织细胞,通过胚状体发生途径再生转基因植株。实验发现:80μmol/L的乙酰丁香酮诱导处理农杆菌和葡萄愈伤组织后可将转化效率提高50倍。OD值为0.8的农杆菌菌液稀释8—10信后与在G培养基预培养10天的胚性愈伤组织共培养2—3夭,Ti质粒对葡萄愈伤组织细胞的转化效率可达50%左右。筛选得到的转基因植株在含Km 30 mg/L的选择培养基上继代存活6个月,生长正常;提取叶片染色体DNA做Southern blot,杂交结果为阳性。将转基因植株各部分切段置于含Km 50 mg/L的选择培养基上,能够脱分化产生抗性愈伤组织并能增殖。     

Ti质粒T区基因4的分离及其在高等植物中的表达

根癌农杆菌Ti质粒的T区DNA上带有致瘤基因,其基因4编码细胞分裂素合成酶。以pGV 354(pBR 322质粒中插有Ti质粒C 58 T区DNA的HindⅢ15-HindⅢ22大片段)重组质粒出发,我们分离了基因4,并通过基因载体pGV 3850引入了高等植物。结果证明基因4能促使烟草、向日葵,石刁柏等转化组织分化长芽。DNA分子杂交表明,转化的烟草中有正常植物所没有的基因4同源片段存在。     

分离的蚕豆细胞核的RNA聚合酶活力的研究

利用Triton X-100对叶绿体膜的作用,可快速地从蚕豆幼叶制备较纯净的细胞核,它具有较高的RNA聚合酶活力。比较了两种分离核的方法,证明利用匀浆法制备的核具有较高的活力。核活力与发育时期有关系,茎端和第1对幼叶的核活力显著高于第2和第3对叶片的核活力。此外,核活力明显地受反应液内锰离子的抑制。     

蚕豆上胚轴愈伤组织的生长和分化(简报)

豆科植物的组织培养对细胞学和遗传学研究有很大意义。尤其蚕豆有细胞核较大和染色体数目少等特点,遗传背景又较清楚,更是一个理想的实验系统。但是,利用蚕豆培养细胞进行的研究还不多,原因是愈伤组织生长缓慢,并容易发生褐化和坏死,而且,至今在诱导植株再生方面还没有获得成功。我们对蚕豆的上胚轴发生的愈伤组织的生长速度和分化能力进行了研究,结果证明愈伤组织的生长主要与培养基内生长     

抗虫转基因甘蓝及其后代的研究

通过农杆菌感染法将苏云金杆菌杀虫蛋白基因转移进了甘蓝的基因组,带子叶柄的子叶作为外植体与农杆菌共培养.发生在子叶柄基部的愈伤组织在含卡那霉素(Km)15～30mg/L的MS培养基上进行筛选,约5%外植体上的愈伤组织继续长大,当移到含Km和6-BA的分化培养基上时,愈伤组织分化出绿色的芽.将芽分离培养,约80%在加有Km的培养基上被诱导生了根.未转化的对照组织在筛选培养基上不能分化出正常的芽和根系,并且逐渐褐化死亡.小菜粉蝶的幼虫被饲喂以转基因植株的叶片,幼虫出现中毒症状,表现为发育受阻和死亡.约20%受试植物的DNA与苏云金杆菌杀虫蛋白基因探针杂交显阳性带.由转基因植株的种子长成的第2代甘蓝幼苗的卡那霉素抗性和植株的抗小菜粉蝶的活力均符合孟德尔单基因分离规律.     

植物细胞生物学学术讨论会简讯

中国植物学会于10月25～31日在湖南省大庸市召开了“植物细胞生物学学术讨论会”到会代表共120余人。会议听取了六个专题报告:第14届国际植物学会传达(朱激,张伟成);植物生长发育与基因表达(赵微平);植物基因工程研究的新进展(白永延);超分子结构(朱激):细胞骨架(简令成、林忠平);植物钙调素(孙