几种生长物质对烟草叶肉原生质体再生壁形成的影响

用EA_3-867纤维素酶分离的烟草(Nicotiana tabacum)叶肉原生质体,在附加不同生长物质的NT培养基中进行液体浅层培养。用荧光增白剂VBL染色荧光法研究了几种生长物质对再生壁形成的影响。结果表明,激动素为再生壁形成所必需,2,4-D对壁的再生无效,但缺少时会影响细胞的活力;香豆素和三碘苯甲酸分别在200 mg l~(-1)和20 mg l~(-1)以上的浓度下,抑制壁的再生;ABA不抑制壁的再生,但引起出芽;GA_3不影响壁的再生,但100 mg l~(-1)的浓度在一定程度上抑制壁的再生。     

烟草叶肉原生质体再生壁形成中的呼吸途径研究

用EA_3~-867纤维素酶分离的烟草(Nicotiana tabacum)叶肉原生质体,在附加 EMP途径的抑制剂 NaF或 HMP途径的抑制剂 Na_3PO_4的NT培养基中进行液体浅层培养。用荧光增白剂 VBL染色荧光法和溶解氧电极极谱法分别研究EMP途径和 HMP途径对烟草叶肉原生质体壁的再生和氧的吸收的影响。结果表明,当EMP或HMP途径被抑制时,氧的吸收,壁的再生和细胞生长都受到抑制;当 EMP和 HMP途径同时被抑制时,上述过程的抑制更甚。初步认为,EMP途径和 HMP途径在壁的再生中同时存在,并且都起着重要作用。     

烟草叶肉原生质体再生壁形成的培养条件的研究

用EA_3-867纤维素酶分离的烟草(Nicotiana tabacum)叶肉原生质体,在不同培养条件下进行液体浅层培养,用荧光增白剂VBL染色荧光法和低渗冲击法研究了再生壁形成的某些培养条件。结果表明,600～1000米烛光的弱光、10~5个原生质体/毫升的密度以及蔗糖或甘露醇作碳源,有利于壁的再生。     

24份铁皮石斛种质资源的ISSR分析

本文采用ISSR分子标记方法分析了24份不同地区来源铁皮石斛种质资源的遗传多样性和亲缘关系。利用筛选出的7条ISSR引物对铁皮石斛基因组DNA进行PCR扩增,共获得92条DNA条带,其中多态性条带84条,多态性比率(PPB)为91. 3%。利用POPGENE 32软件计算得出平均观察等位基因(Na)为1. 913 0,平均有效等位基因数(Ne)为1. 528 3,平均Nei’s基因多样性指数(H)为0. 310 0,平均Shannon’s信息指数(I)为0. 465 0。利用NTSYS-pc软件得出24份试验材料的遗传相似系数(GS)范围为0. 478 3～0. 913 0,聚类分析结果表明24份人工栽培居群的铁皮石斛分为3类,暗示铁皮石斛种质具有较为丰富的遗传多样性。该研究为全面掌握铁皮石斛种质资源遗传背景,选育、引种和推广优良铁皮石斛品种奠定了可靠的理论基础。     

拟南芥GH3.9基因的过表达及其表型分析

为研究GH3.9基因在植物生长发育过程中的作用,利用RT-PCR成功克隆到GH3.9基因,该基因全长为1 750bp。通过构建pEGAD-GH3.9过表达载体转化拟南芥,获得过表达GH3.9基因纯系转基因株系GH3.9ox-3和GH3.9ox-7。对拟南芥野生型(WT)和转基因株系(GH3.9ox-3和GH3.9ox-7)幼苗用不同光强和光质进行处理,结果显示:在蓝光、红光、远红光等不同光照强度下培养,过表达株系幼苗下胚轴的生长均明显受到抑制,且较野生型明显;采用不同光周期处理拟南芥幼苗,过表达幼苗下胚轴的伸长明显低于野生型;对成年植株表型进行观察,发现过表达株系植株矮小、雄蕊变短、果荚短小。研究表明:GH3.9基因参与了拟南芥生长发育调控,过表达GH3.9基因对拟南芥生长有抑制作用。     

元麦叶肉原生质体细胞壁再生过程中的扫描电镜观察及过氧化物酶活性

元麦叶肉原生质体在MS培养基(附加2,4-D 1mg/L,6-BA 0.25 mg/L)中,进行液体浅层培养。用荧光增白剂(VBL)染色,培养1天出现再生壁。通过扫描电镜观察,发现随着培养时间的延长,原生质体表面逐渐出现短棒状突出物和纤维状结构;培养第5天,原生质体表面覆盖较厚的纤维层,与未脱壁的元麦叶肉细胞表面形态结构相似。用愈创木酚作氢供体测定原生质体胞壁再生过程中过氧化物酶活性,发现随着壁再生率提高,过氧化物酶活性明显下降。用聚丙烯酰胺凝胶电泳分离阳极向过氧化物酶同工酶酶谱,酶带也随着培养时间的延长而减少。由刚分离的原生质体中的8条减少到培养4天的2条,反映胞壁再生和过氧化物酶活性呈负相关。     

拟南芥3个蛋白磷酸酶2C基因编码蛋白的亚细胞定位及组织表达分析

利用gateway技术从拟南芥中克隆了3个蛋白磷酸酶2C基因At5G66080、At1G68410和At5G06750,3个基因的ORF全长分别为1 158 bp、1 311 bp和1 182 bp,分别编码一条385、376和393个氨基酸残基的多肽.构建了3个基因的植物表达载体35S:GFP:At5G66080、35S:GFP:At1G68410和35S:GFP:At5G06750,采用基因枪法进行的洋葱表皮细胞GFP瞬时表达实验表明,荧光信号主要分布在细胞核上,显示这3个基因的产物可能在细胞核上发挥作用.利用实时荧光定量PCR研究At5G66080、At1G68410和At5G06750基因在不同组织中的表达特性,结果表明:3个基因在各个器官均有表达,但表达量不同;At5G66080、At1G68410和At5G06750基因在花中表达量最大;At5G66080和At5G06750基因在根、叶和叶柄中的表达量次之,在茎中的表达量最低;At1G68410基因在根中的表达量次之,在茎、叶和叶柄中的表达量较低.     

黄秋葵不同品系和不同组织部位的果胶和咖啡因含量比较研究

黄秋葵是一种具有保健功效的经济作物。通过对10个黄秋葵品系及QK-6不同组织的果胶和咖啡因含量进行了测定,实验结果表明,黄秋葵品系间(取幼嫩果荚为参比)及同种不同部位间的果胶含量差异较大,其中QK-4的果胶含量最高,为24.05%;QK-6中幼嫩果荚的果胶含量明显高于其它部位,达到20.73%。此外,所有黄秋葵中均检测不到咖啡因。上述研究结果为黄秋葵的药用、食用和经济价值的深度开发提供了科学依据。     

亚麻籽油中亚麻酸的提取与纯化

研究采用尿素-硅胶和氯化亚铜-硅胶两次层析亚麻籽油,结果表明:尿素-硅胶层析后,亚麻籽油中只含有油酸、亚油酸和亚麻酸;氯化亚铜-硅胶层析后得到了纯度高于90%的亚麻酸产品。运用外标定量法,以亚麻酸甲酯为标准品,样品总亚麻酸在0. 045～0. 677 mg/m L范围内回归方程为:Y=782 59x-686 8(R2=0. 999 9)。本研究为今后亚麻酸的纯化研究及工业生产提供相关的理论依据和新的思路。