可乐饮料中咖啡因含量测定——有机物提取分离研究性学习案例

人教版生物学选修1生物技术实验中,介绍了橘皮中芳香油的提取与分离技术,研究性学习小组以此作为出发点,对实验装置进行改装,开展可乐饮料中咖啡因的提取与含量测定的探究活动。通过分光光度法测得某品牌瓶装可乐的咖啡因含量为3.734 mg/kg。结合咖啡因的药理性质,为保持身体健康,成年人每天的可乐饮品摄入量最好不要超过2 000 g。     

萎缩芽胞杆菌(Bacillus atrophaeus)GJW2-1可湿性粉剂研制及对党参灰霉病的防治效果

以萎缩芽胞杆菌（Bacillus atrophaeus）GJW2-1为试验材料,研制一种对党参灰霉病具有良好防治效果的可湿性粉剂。采用单因素法和正交试验法筛选出对菌株GJW2-1活性影响最小的载体和助剂及其配比,并对其稳定性和盆栽防效进行评价。结果表明,萎缩芽胞杆菌 GJW2-1 可湿性粉剂最佳配方为载体高岭土35%,分散剂羧甲基纤维素钠4%,紫外保护剂β-环糊精3%,湿润剂十二烷基苯磺酸钠10%。该可湿性粉剂活菌含量1×10⁹ cfu/g,湿润时间57 s,悬浮率81%,pH值7.1,含水率2.03%,且具有较好的稳定性。盆栽防效结果表明,该可湿性粉剂100倍稀释液对党参灰霉病的预防和治疗效果最好,分别为81.75%和71.56%。     

VPAC2在CHO细胞的表达及鉴定

PAC2是垂体腺苷酸环化酶激活多肽(Pituitary adenylate cyclase activating polypeptide,PACAP)和血管活性肠肽(vasoactive intestinal peptide,VIP)的共同受体,介导多种重要生物学功能。为获得稳定特异表达VPAC2的中国仓鼠卵巢(Chinesehamsterovary,CHO)细胞,将pcDNA-VPAC2表达载体转染CHO细胞,G418筛选转染阳性克隆,PACAP38标准品诱导阳性克隆细胞的胞内cAMP生成,筛选出对PACAP38最为敏感的阳性单克隆细胞株(VPAC2-CHO),运用RT-PCR、Westernblot和免疫荧光法检测VPAC2受体表达情况,利用VPAC2受体特异激动剂通过竞争性结合试验和促进胞内第二信使cAMP生成的活性检测实验证实,VPAC2-CHO特异表达有功能的VPAC2。Scatchard作图分析显示VPAC2-CHO的VPAC2受体密度为(1.1±0.2)pmol/mg膜蛋白,PACAP38与VPAC2的解离常数Kd值为(0.55±0.10)nmol/L。特异表达VPAC2受体细胞系的构建为深入研究该受体理化性质、生物学功能以及筛选、开发VPAC2受体新型特异激动剂和拮抗剂等研究奠定了基础。     

硅-玻璃聚合酶链式反应微芯片对β-葡糖苷酸酶基因的扩增

聚合酶链式反应（PCR）微芯片是基于微机电系统（MEMS）制作,在微芯片上进行PCR反应,实现生物样品扩增的一项新技术.介绍了硅-玻璃PCR微芯片的设计和制作、微反应腔的清洗和表面处理、借助外置温度控制系统进行PCR扩增反应以及扩增产物在琼脂糖凝胶电泳下的检测分析,实现了对β-葡糖苷酸酶（GUS）基因的有效扩增,扩增时间由原来的90 min缩短到现在的37 min.     

阔叶丰花草对荔枝园杂草群落特征及物种多样性的影响

【目的】明确阔叶丰花草在荔枝园定植对杂草群落特征及物种多样性的影响,为阔叶丰花草在果园应用提供参考依据。【方法】通过调查广东茂名高州荔枝国家现代农业产业园的荔枝园中90个有、无阔叶丰花草样方中杂草群落组成、群落高度以及物种多样性,探究阔叶丰花草定植对荔枝园杂草群落结构及物种多样性的影响。【结果】阔叶丰花草在荔枝园定植后,杂草种类减少,由对照样方的42种减少到试验样方的30种;杂草群落结构显著改变,牛筋草、白花鬼针草等恶性杂草重要值降低,薇甘菊、香附子、火炭母等杂草消失;阔叶丰花草的重要值与杂草群落高度和物种多样性指数为显著性负相关(P0.001),且均呈显著三项式回归关系。阔叶花草在荔枝园定植后可建立结构较为单一,且低矮的杂草群落。【结论】阔叶丰花草有望成为荔枝园生草的有益草种。     

嗜水气单胞菌RPA-LFD快速检测方法的建立

文章旨在建立一种针对嗜水气单胞菌的敏感性高、特异性强的快速临床诊断方法。研究根据嗜水气单胞菌促旋酶B亚单位(gyrase subunit B, gyrB)基因的保守序列,设计特异性重组酶聚合酶扩增技术(RPA)扩增引物,通过结合琼脂糖凝胶电泳(AGE)和侧流层析试纸条(LFD)的方法进行反应条件的优化、特异性及灵敏度检测。实验结果表明,所建立的嗜水气单胞菌RPA-LFD快速检测方法可在38℃最适温度下30min内无干扰地检测到嗜水气单胞菌,对嗜水气单胞菌纯培养物和基因组DNA的最小检出限为10³ cfu/mL和100 pg/μL。利用建立的RPA-LFD与普通PCR同时检测杂交鲟鱼处理临床样品的结果表明,两种方法的结果一致。综上所述,通过对RPA反应条件的探索和优化,成功建立了嗜水气单胞菌快速检测方法。该方法操作简便,反应迅速,与普通PCR相比,不需要昂贵的仪器,为未来嗜水气单胞菌细菌性疾病的早期诊断提供了更有效的技术支持。     

黄蒿挥发油对蚊虫的毒杀活性及其化学成分

采用培养板浸液法和三角瓶药膜法研究了黄蒿挥发油对蚊虫幼虫和成虫的毒杀效果,采用GC MS-DS联用分析了其化学成分.结果表明,挥发油对淡色库蚊幼虫和成虫具有较高的作用效果,且作用速度较快.对幼虫处理后2 d的LC₅₀值约为12.5 mg·L^-1.综合毒力测定显示,挥发油对成虫具有明显的击倒和致死作用,1 μg·cm^-2和10 μg·cm^-2剂量24 h致死率分别为70%和100%.黄蒿含挥发油0.38％,共鉴定出38种化合物,检出物占总质量87.53％,其中萜烯类12种,占45.04％,为黄蒿挥发油的主要成分.     

ORP8 与SPAG5 相互作用并影响细胞周期

目的:筛选与氧化固醇结合蛋白相关蛋白8(Oyxterol binding protein related protein 8,ORP8)相互作用的蛋白质,为揭示ORP8在细胞中的功能及其机制提供线索,并根据相互作用蛋白质初步探索ORP8的功能.方法:构建重组诱饵质粒Pgbkt7-ORP8m,利用GAL4酵母双杂交系统筛选人Universal Cdna文库,筛选出与ORP8相互作用的蛋白质,通过GST Pull-down以及免疫共沉淀(Co-immunoprecipitation,Co-IP)验证蛋白质相互作用,并通过流式细胞仪检测过表达ORP8对HepG2细胞周期的影响.结果:酵母双杂交筛选得到了精子相关抗原5(Homo sapiens sperm associated antigen 5,SPAG5),体外GST pull-down和Co-IP实验确证了ORP8-SPAG5的相互作用,流式细胞术显示ORP8过表达后与空载体相比,人肝癌细胞系HepG2的S期细胞数增加,G1期细胞数减少.结论:SPAG5是与ORP8相互作用的蛋白质,ORP8过表达影响人肝癌细胞系HepG2的细胞周期,可能通过SPAG5起作用.ORP8-SPAG5的相互作用为进一步研究ORP8在肝细胞中的功能及其机制提供了有用的线索     

沙棘中三萜酸物质的提取及含量测定

沙棘是一种含有丰富营养物质和生物活性成分的植物。为了进一步提高新疆阿合奇县沙棘中三萜酸物质的得率,利用单因素实验与正交试验优化沙棘中三萜酸物质的提取工艺,并分析比较沙棘不同部位的三萜酸物质含量差异。通过单因素实验确定了影响萜类物质得率的重要因素为乙醇浓度、料液比。以总三萜酸的得率为综合考察指标,采用正交试验确定了沙棘三萜酸的最适提取工艺条件：按照料液比1∶15(g/mL)加入体积分数80%的乙醇,先超声1 h,再将料液进行60℃水浴回流1.5 h。在此条件下,沙棘叶中三萜酸的得率达到2.332 mg/g,其中科罗索酸为0.332 mg/g、齐墩果酸为0.875 mg/g,熊果酸为1.125 mg/g。沙棘不同部位的三萜酸总含量(从大到小)顺序为沙棘叶、沙棘籽、沙棘果。     

亚热带典型绿化灌木对夜间人工光照的生理响应

夜间人工光照正在迅速蔓延，成为全球变化的一个重要组成部分。尽管许多研究关注了它的潜在生态影响，但绿化植物对夜间人工光照的生理响应机制研究相对匮乏。本研究以我国亚热带地区常见的城市绿化灌木圆锥绣球、红叶石楠和金森女贞为对象，模拟不同光质(黄光、白光)下不同光强(20、40和60 lx)的夜间光环境，研究植物抗氧化酶系统以及生物量的响应特征。结果表明：夜间人工光照显著提高了3种灌木的细胞膜质过氧化程度，激发了植物抗氧化保护系统，显著提高了抗氧化酶活性。光质对植物抗氧化酶的影响因植物种类而异，圆锥绣球在白光下的过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)活性分别是黄光下的1.5和1.3倍，红叶石楠2种酶活性在白光下均为黄光下的1.1倍，而金森女贞2种酶活性在白光下分别是黄光下的88.6%和99.5%。3种灌木抗氧化酶活性随夜间光强的增加而增加，但超过一定光强阈值(120 d时，阈值约为40 lx)后，丙二醛含量迅速增加，抗氧化酶活性降低。3种灌木在夜光胁迫下起主要作用的保护酶不同，圆锥绣球通过POD与CAT互补来抵御胁迫带来的氧化伤害，金森女贞的主要作用酶为POD。3种灌木在夜间人工光照下生物...