对虾白斑病毒1197基因的表达和产物纯化的研究

1993年以来,我国沿海省份相继发生养殖对虾大批死亡现象,损失严重,引起国内外研究者的重视.经过一段时间的努力研究后,我们报导了引起该病的病原是一种无包含体的杆形病毒[1].此后,该病毒的一些其他特性及引起对虾的病理学及组织学的变化又陆续见诸于报导[2,3].前文中我们报导了该病毒的一个早晚期基因1197的克隆和序列分析,并针对此基因设计了二个核酶,在体外成功地对此基因进行了切割[4].本文报导我们对该基因进行了原核表达,并对表达产物进行了纯化的研究,以期为阐明该基因表达产物的功能打下进一步研究的基础.     

水稻齿叶矮缩病毒Segment 9 dsRNA的序列分析及其在大肠杆菌DE3中的表达

通过有机试剂抽提,ＣＦ－１１纤维素柱层析,从感染水稻齿叶矮缩病毒菲律宾分离株（ＲｉｃｅＲａｇｇｅｄＳｔｕｎｔＶｉｒｕｓ,Ｐｈｉｌｉｐｐｉｎｅｉｓｏｌａｔｅ,简称ＲＲＳＶ－Ｐ）的水稻植株中获取该病毒的全基因组,即获得从Ｓｅｇｍｅｎｔ１到Ｓｅｇｍｅｎｔ１０（Ｓ１－Ｓ１０）的１０条双链ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）,然后设计合适的引物,用ＲＴ－ＰＣＲ方法得到Ｓ９的ｃＤＮＡ并将其克隆到ｐＵＣ１１９质粒上扩增,以双链测序法测定该ｃＤＮＡ的全序列。同时又将此ｃＤＮＡ克隆到大肠杆菌表达质粒ｐＧＥＸ－３Ｘ上,在大肠杆菌菌株ＤＥ３中用ＩＰＴＧ诱导表达,经超声波破菌、离心、Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ－ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析,得到纯化的分子量为６４ｋＤ的融合蛋白。     

水稻齿裂矮缩病毒PS9蛋白的定位及在昆虫传毒中的功能

利用大肠杆菌融合表达系统表达并纯化水稻齿裂矮缩病毒（ＲＲＳＶ）Ｓ９编码蛋白ＰＳ９。以ＰＳ９的融合蛋白的抗体为一抗，胶体金标记的ｐｒｏｔｅｉｎＡ为二抗，进行ＰＳ９在ＲＲＳＶ病毒颗粒上的免疫标记和定位，从而证明ＰＳ９是病毒突起的一个组分。病毒媒介昆虫—褐飞虱的传毒实验结果表明ＰＳ９可以抑制昆虫的传毒作用，提出在病毒颗粒进入昆虫细胞时，可能需要ＰＳ９与细胞表面的病毒受体的结合和作用。     

核酶对对虾白斑病毒的一个可能的早晚期基因的体 …

报道了对虾白斑杆状病毒的一个可能的早晚期基因（１１９７ｂｐ基因）的克隆和序列分析,并针对此基因的转录产物,用计算机软件设计了二个锤头状核酶（ＲＺ１和ＲＺ２）。体外切不两个核酶均能在合适条件下,对靶基因进行完全的切割。这些研究表明,有可能利用核酶对对虾杆状病毒的复制和增殖进行抑制。     

纤维素酶基因的克隆和表达

纤维素酶是可以分解纤维素的酶。纤维素的单体是葡萄糖,葡萄糖之间通过β-1、4糖苷键连接成纤维素的大分子。从理论上说纤维素水解后可以转变成葡萄糖。但由于天然纤维素为一不溶性聚合物,目前通过纤维素酶酶介途径利用纤维素废物与达到实用阶段还有一段距离。一般认为从纤维素到葡萄糖的转变需要β-1,4葡聚糖内切酶[E、C、3、2、1、4]、     

含四个串联核酶和GFP基因的转基因质粒的构建

以含绿色荧光蛋白(GFP)基因的质粒pSK100-DS、含切割对虾杆状病毒基因的核酶Rz1的质粒pRGRz1、含核酶Rz2的质粒pRGRz2和转基因空质粒pcDNA3为基础,把绿色荧光蛋白GFP基因克隆于pcDNA3的SV40启动了下面,由SV40启动子控制含四个两种核酸基因的四联体克隆于pcDNA3的多克隆位点区,由T7启动子控制,构建成含两个Rz1、两个Rz2和GFP基因的转基因质粒pGTR,以用于转基因抗病毒对虾的研究.     

人心肌肌球蛋白轻链1与重链和肌动蛋白的结合

在测得中国人心肌肌球蛋白轻链 1cDNA的核苷酸序列 ,并获得一株单克隆抗体 (HCMLC1 8)的基础上 ,用PCR方法 ,以中国人心肌肌球蛋白轻链 1的cDNA为模板 ,分别获得中国人心肌肌球蛋白轻链 1的各为 98个氨基酸的N端和C端片段cDNA的克隆并进行了表达。同时进行了其表达产物和大鼠心肌肌球蛋白重链和人心肌肌动蛋白以及单克隆抗体结合的研究 ,发现三者均和轻链 1的N端相结合 ,结合位点各不相同。这些结合位点可能均位于轻链 1的分子表面 ,而且如果轻链 1在实验状态下先与肌动蛋白结合 ,则有可能影响轻链与重链间的彼此结合。肌动蛋白在体外能以不同位点结合肌球蛋白重链和轻链 ,可能在肌肉收缩过程中具有重要的生理意义