江浙蝮蛇毒中性磷脂酶A2晶体的非晶体学对称性研究

用悬滴气相扩散法获得了突触前神经毒素中性磷脂酶A₂的晶体,空间群为P2₁,并有明显的C2赝对称性.晶胞参数为a=10.836nm,b=8.486nm,c=7.082nm,β=109.87°在Siemens X-200B面探测器上收集了0.26nm分辨率的衍射数据.赝C2对称性揭示存在一个平行于晶体学b轴方向的非晶体学二重对称轴.采用POLARRFN程序进行分子置换法的自身旋转函数计算,在不同积分半径和分辨率范围均得到了稳定且相对突出的4个峰,对应3个一般方向的非晶体学二重对称轴和1个特殊的非晶体学对称关系.从它们之间的相互关系推测晶胞内多个分子的堆积情况:分子可能以二体形式存在,并以“二体的二体”方式排列.     

江浙蝮蛇毒碱性磷脂酶A2正交晶体分子置换法结构测定

江浙蝮蛇(Agkistrodon halys pallas)毒碱性磷脂酶A2具有很强的溶血作用.P2₁2₁2₁晶型的晶体学不对称单位中含有2个分子.用自身旋转函数研究了此2分子的相对空间关系,用交叉旋转函数和平移函数测定了2分子在晶胞中的取向与位置.在此基础上进行了初步的三维结构模型构建与结构修正.碱性磷脂酶A2正交晶体不对称单位中2个分子的排布呈现非晶体学二重对称关系.     

江浙蝮蛇毒溶血毒素晶体培养及初步晶体学研究

从江浙蝮蛇中分离纯化的碱性磷脂酶Ａ２在ｐＨ９．５,０．０５ｍｍｏｌ／ＬＣＨＥＳ缓冲液中,用汽相悬滴扩散的方法,获得了适用于高分辨率Ｘ射线结构分析的单晶．经Ｘ２００Ｂ面探测器分析,表明该晶体属于正交晶系,Ｐ２Ｉ２Ｉ２Ｉ空间群,晶胞参数为ａ＝９７．１３,ｂ＝１０３．６９,ｃ＝２３．２７．并收集了一套衍射数据,独立衍射点数１２００１个,数据完整度为８６．２％,Ｒｍｅｒｇｅ为０．０４５９．最高分辨率达２．０,根据分子量与晶胞体积估算,一个不对称单位含两个分子．     

Refined structure of basic phospholipase A2 from venom of Agkistrodon halys Pallas in orthorhombic crystal form I at 0.25 nm resolution

The basic phospholipase A2 from the venom of Agkistrodon halys Pallas is a potent hemolytic toxin and anticoagulant. The accurate rotation and translation parameters of the molecules in orthorhombic crystal form I were successfully obtained using the fitting refinement technique. The structure was refined in the resolution range of 0. 6-0.25 nm using least square refinement with non-crystallographic two fold symmetry restraint, and resulted in the final R factor of 20.1 % , and the rms deviations from ideal stereochemistry were 0. 001 3 nm for bond lengths and 1. 32° for bond angles. The overall architecture of the present structure was similar to that of the determined structure of the orthorhombic crystal form Ⅱ, with a few differences in the regions of the β-wing and Ca2 -binding loop. The dimers formed by the two molecules in the asymmetric unit in both crystal forms were also similar. However, one of the monomers showed an orientational difference of 5.5° along the dimer interface in the two cr     

干扰素调节因子家族和免疫调控

干扰素(IFN)是一类能够抵抗病毒感染、抑制细胞周期和行使免疫调节功能的细胞因子。干扰素调节因子家族(IRF)成员因在病毒感染时能够结合到IFN启动子上诱导、调节IFN的表达而得名。最近的研究表明:IRF是一类多功能的转录因子,在干扰素转录调控,病原体免疫反应,细胞因子信号转导,细胞增殖调控;以及造血干细胞的发育、淋巴细胞的分化,自稳平衡,先天性免疫和适应性免疫调控等方面都有着重要的作用。IRF的功能及其分子机制的揭示将对抗病毒,免疫疾病和恶性肿瘤的治疗提供新的靶向策略。     

江浙蝮蛇毒溶血毒素晶体培养及初步晶体学研究

从江浙蝮蛇中分离纯化的碱性磷脂酶Ａ２在ｐＨ９．５,０．０５ｍｍｏｌ／Ｌ ＣＨＥＳ缓冲液中,用汽相悬滴扩散的方法,获得了适用于高分辨率Ｘ射线结构分析的单晶。经Ｘ２００Ｂ面探测器分析,表明该晶体属于正交晶系,Ｐ２Ｉ２Ｉ２Ｉ空间群,晶胞参数为ａ＝９７．１３Ａ,ｂ＝１０３．６９Ａ,ｃ＝２３．２７Ａ。并收集了一套衍射数据,独立衍射点数１２００１个,数据完整度为８６．２％,Ｒｍｅｒｇｅ为０．０４５９。最高分辨     

竹叶青蛇毒血小板聚集剂的分离纯化及生化特性

经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５凝胶过滤和ＦＰＬＣＭｏｎｏＱ阴离子交换柱层析及Ｓｕｐｅｒｏｓｅ－１２凝胶过滤,从竹叶青蛇的蛇毒中纯化到一个能诱导人血小板聚集的均一组分．经ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳测定其分子量为６８０００左右．等电点为４．３．测定了它的氨基酸组成,对它活化血小板的作用机理进行了初步研究,结果表明它是一种强的血小板激动剂．     

脱Ca~（2＋）与结合Ca~（2＋）蝮蛇毒酸性磷脂酶A_2晶体的培养和X射线衍射数据

钙离子是磷脂酶Ａ２催化必须的铺因子,以蝮蛇毒酸性磷脂酶Ａ２为材料,采用在晶体培养液中加入ＥＤＴＡ或ＥＧＴＡ螯合剂络合法除去ＰＬＡ２中可能有的Ｃａ＾２＋离子和加入ＣａＣｌ２以确保ＰＬＡ２能克分结合上钙离子的方法培养充分结合Ｃａ＾２＋和脱Ｃａ＾２＋的ＰＬＡ２晶体。加了螯合剂后长出的晶体为长棒状六方柱,加Ｃａ＾２＋离子后长出的晶体则为短粗的六方柱。经Ｘ射线鉴定两种晶体为同晶型,空间群为Ｐ６１,晶胞参数很     

蛋白水解酶抑制剂对人精子穿透去透明带田鼠卵子的抑制作用

本文研究了慈姑和天花粉两种天然的蛋白水解酶抑制剂对人精子穿透去透明带田鼠卵子的影响。结果显示:(1)在人精子获能期1.0×10~(-3)mol/L天花粉抑制剂可使人精子的穿卵率明显下降(P<0.01),而同样浓度的慈姑抑制剂,作用不明显。(2)去透明带田鼠卵子预先用抑制剂处理0.5h,被获能精子的穿卵率和未用抑制剂处理的卵子相似。(3)在获能后的人精子和去透明带田鼠卵子孵育期,两种抑制剂的浓度为0.5或1.0×10~(-3)mol/L时,精子的穿卵率明显下降。(4)在人精子获能期及人精子/去透明带田鼠卵子孵育期,两种抑制剂的浓度为1.0×10~(-3)mol/L时,均使精子的穿卵率下降(P<0.01),而抑制剂的浓度为1.0×10~(-4)mol/L时,作用不明显。(5)抑制剂不影响人精子的活动能力。这样看来,涉及精子穿透卵子的酶体系受到了蛋白酶抑制剂的影响。     

江浙蝮蛇毒中性磷脂酶A_2的荧光光谱学研究

用荧光光谱方法研究了江浙蝮蛇毒中性磷脂酶A_2(NPLA_2).研究结果表明NPLA_2分子中确实含有一个色氨酸残基.且位于NPLA_2分子表面;我们还发现荧光探针bis-ANS在NPLA_2分子上有一结合区,其解离平衡常数为11.6μmol/L ;利用结合了的bis-ANS与NPLA_2分子中色氨酸残基之间的能量传递计算出两者之间的距离为17.7(?).