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重组人GM—CSF基因在昆虫细胞中的表达 总被引:1,自引:0,他引:1
利用苜蓿夜蛾核型多角体病毒(AcNPV)带β-Galactosidase基因标记的非融合蛋白基因转移载体pBlueBac将人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(hGM-CSF)基因成功地插入病毒AcNPV的基因组中.hGM-CSF基因在感染重组病毒的草地夜蛾(Spodopterafrugiperda)培养细胞Sf9中得到表达,感染后的Sf9细胞培养液能刺激人骨髓细胞在体外形成典型的集落,表达水平可达2.7×1055CFU/ml。以hGM-CSF单抗所作的WesternBlotting表明,表达的hGM-CSF对是3种糖基化程度不同的产物,分子量分别约为15kd,18kd和20kd。 相似文献
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蝮蛇毒碱性磷脂酶A_2基因的克隆 总被引:2,自引:0,他引:2
从蝮蛇毒腺中抽提总RNA.利用人工合成寡核苷酸引物作逆转录,以cDNA为模板进行体外扩增,获得磷脂酶A2(简称PLA2)基因,克隆至pBS-ks载体中。通过对3个碱性PLA2(简称BPLA2)基因单独克隆分别作DNA全序列分析,推导pro-BPLA2由138个氨基酸残基构成,与已测定的部分氨基酸序列比较,基本相符。该基因成功的克隆,不仅推导出BPLA2的蛋白质全序列,也为进一步开展蛇毒功能肽蛋白质工程的研究工作打下了良好的基础。 相似文献
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中国棉铃虫核型多角体病毒DNA聚合酶基因的克隆和序列分析 总被引:4,自引:0,他引:4
应用谷实夜蛾核型多角体病毒(HzSNPV)DNA聚合酶基因HindⅢ/PstⅠ3596bp片段作探针,经Sourthernblot杂交,克隆了中国棉铃虫核型多角体病毒(HaSNPV)完整的DNA聚合酶基因,大小约为3.4kb。限制性内切酶分析表明,HaSNPVDNA聚合酶基因限制性内切酶图谱与HzSNPV相似。用双脱氧链终止法测定该基因部分核苷酸序列(805bp),推导出编码区206a。序列同源性比较显示,HaSNPVDNA聚合酶与HzSNPV之间具有高度的同源性;与LdMNPV、AcMNPV、BmSNPV、CfMNPV和OpMNPV也具有一定的同源性 相似文献
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人修饰型降钙素和鼠酰胺化酶基因在昆虫细胞中的偶联表达 总被引:2,自引:0,他引:2
人降钙素 (hCT)是 32氨基酸的多肽激素 ,C-端为α脯氨酰胺结构 ,具有调节体内钙、磷代谢等许多重要生理功能。用重组昆虫杆状病毒表达系统 ,偶联表达合成的人修饰型降钙素 (hmCT)基因与GST融合基因和大鼠酰胺化酶 (PAM)基因 ,再用抗hmCT或抗PAM抗体 ,既检测到由昆虫细胞表达的GSThmCT产物也检测到PAM产物。经GSH 琼脂糖凝胶亲和层析 ,分离纯化GSThmCT融合蛋白。这种蛋白修饰酶与底物在真核细胞偶联表达也将适用于其他生物活性肽的体外表达 相似文献
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通过PCR方法构建了促肾上腺皮质激素4-10 (ACTH(4-10))与胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)的融合基因,并将它重组克隆到表达载体pET-28a(+)中,构建表达质粒pET-ACTH(4-10)-GDNF,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导可高效表达ACTH(4-10)-GDNF融合蛋白.用Ni2+-NTA树脂一步法纯化目的蛋白,纯度达85%以上.纯化和复性的ACTH(4-10)-GDNF融合蛋白能显著促进脊髓神经元存活,作用强于ACTH(4-10)及GDNF蛋白. 相似文献
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根据文献报道垂体腺苷酸环化酶激活肽(pituitary adenylate cyclase activating polypeptide, PACAP)的氨基酸序列,推导出其核苷酸序列并设计成部分互补的6条寡核苷酸片段,利用DNA合成仪人工合成、纯化这6条寡核苷酸片段,通过片段退火、连接、克隆及测序鉴定获得了PACAP基因.将PACAP基因克隆至pGEX-4T-3质粒中转化BL21进行表达分析,融合蛋白约占细胞总蛋白的30%,其中部分为可溶性,部分以包涵体形式存在.通过亲和层析纯化GST-PACAP融合蛋白,该蛋白质能促进PC12细胞轴突生长及脊髓神经元存活. 相似文献
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垂体腺苷酸环化酶激活肽基因的合成表达与活性研究 总被引:3,自引:0,他引:3
根据文献报道垂体腺苷酸环化酶激活肽(pituitary
adenylate cyclase activating polypeptide, PACAP)的氨基酸序列,推导出其核苷酸序列并设计成部分互补的6条寡核苷酸片段,利用DNA合成仪人工合成、纯化这6条寡核苷酸片段,通过片段退火、连接、克隆及测序鉴定获得了PACAP基因.将PACAP基因克隆至pGEX-4T-3质粒中转化BL21进行表达分析,融合蛋白约占细胞总蛋白的30%,其中部分为可溶性,部分以包涵体形式存在.通过亲和层析纯化GST-PACAP融合蛋白,该蛋白质能促进PC12细胞轴突生长及脊髓神经元存活. 相似文献
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