Sp1基因RNA干扰载体的构建及鉴定

目的：构建干扰载体pSilencer3.1-Sp1,并初步研究其对Sp1基因的干扰作用。方法：根据Sp1cDNA编码序列,设计并合成针对Sp1基因的特异性RNA干扰片段,并将其克隆入pSilencer3.1-H1neo干扰载体中,构建Sp1基因小干扰RNA（siRNA）真核表达载体pSilencer3.1-Sp1;分别将阴性对照载体pSilencer3.1与重组载体pSilencer3.1-Sp1经脂质体LipofectAMINE2000介导转染HeLa细胞,采用RT-PCR、Western blot方法分别检测Sp1基因的转录与表达水平。结果：构建了Sp1基因siRNA真核表达载体pSilencer3.1-Sp1,经酶切、测序鉴定证实克隆正确,并在mRNA水平和蛋白水平证实了载体的干扰效果。结论：特异性siRNA能明显抑制Sp1基因在HeLa细胞中的表达,为进一步研究Sp1的生物学功能和作用机制奠定了实验基础。     

Spl基因RNA干扰载体的构建及鉴定

目的:构建干扰载体pSilencer 3.1-spl,并初步研究其对Spl基因的干扰作用.方法:根据Spl cDNA编码序列,设计并合成针对Spl基因的特异性RNA干扰片段,并将其克隆入pSilencer 3.1-Hl neo干扰载体中,构建Spl基因小干扰RNA(siRNA)真核表达载体pSilencer 3.1-Spl;分别将阴性对照载体pSilencer 3.1与重组载体pSilencer 3.1-Spl经脂质体LipofectAMINE2000介导转染HeLa细胞,采用RT-PCR、Western blot方法分别检测Spl基因的转录与表达水平.结果:构建了Spl基因siRNA真核表达载体pSilencer 3.1-Spl,经酶切、测序鉴定证实克隆正确,并在mRNA水平和蛋白水平证实了载体的干扰效果.结论:特异性siRNA能明显抑制Spl基因在HeLa细胞中的表达,为进一步研究Spl的生物学功能和作用机制奠定了实验基础.     

紫杉醇联合铂类方案治疗中晚期宫颈癌患者的临床研究

目的:探讨紫杉醇联合铂类方案对中晚期宫颈癌的临床疗效。方法:98例中晚期宫颈癌患者平均分为两组,观察组采用紫杉醇联合铂类方案治疗,对照组采用伊立替康联合铂类方案治疗。分别用电化学发光法、微粒子酶免疫分析法检测血清中人细胞角蛋白21-1片段(CYFRA21-1)、人鳞状细胞癌相关抗原(SCC-Ag)含量,对比两种治疗方案的临床疗效、生存质量、副反应。结果:观察组有效率73.5%显著高于对照组42.9%(P0.01)。治疗后两组血清CYFRA21-1、SCC-Ag较治疗前均有明显降低(均P0.05),且观察组较对照组降低更明显(P0.05)。治疗后,两组躯体功能(PF)、情绪功能(EF)、社会功能(SF)、疲乏(FA)、食欲减退(AP)、疼痛(PA)方面均改善,其中,除EF外,观察组改善均优于对照组(均P0.05)。观察组副反应总发生率显著低于对照组(P0.05)。结论:紫杉醇联合铂类方案对中晚期宫颈癌疗效显著,具有改善患者生存质量、减少副反应、降低血清CYFRA21-1、SCC-Ag水平的优点。     

乙肝免疫标志物与乙肝病毒核酸含量与肝功能的关系研究

目的:研究乙肝免疫标记物(HBV-M)与乙肝病毒脱氧核苷酸(HBV-DNA)载量与肝功能的关系。方法:检测104例乙肝患者HBs Ag、HBe Ag、HBc Ab、HBs Ab、HBe Ab5种HBV-M;用PCR法检测HBV-DNA含量;同时检测天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、胆碱酯酶(CHE)等肝功能指标,对三者关系采用Spearman相关性分析。结果:HBs Ag、HBc Ab、HBe Ag阳性组HBV-DNA阳性率及载量均大于其余组(P0.05);HBe Ag含量、ALT浓度与HBV-DNA载量均呈正相关(r=0.48,P0.05)、(r=0.36,P0.05);AST、CHE与HBV-DNA含量无明显相关性,但在无病毒载量与有病毒载量组之间AST比较有统计学意义(P0.05)。结论:HBV-M、HBV-DNA与肝功能之间有一定的相关性,但HBe Ag阴转不代表病毒复制停止,HBV-DNA也不能完全反应肝损害程度,临床应加大重视。     

不同强度运动结合白藜芦醇对老年肥胖大鼠RBP4的影响

目的：探讨不同强度运动结合白藜芦醇对老年肥胖大鼠内脏脂肪组织视黄醇结合蛋白4（RBP4） mRNA蛋白表达及血浆RBP4浓度的影响。方法：选择鼠龄3周的雄性SD大鼠80只,随机分为对照组和实验组：对照组（C）饲喂6.0%脂肪的普通饲料（n=12）;实验组分3个阶段饲喂36%~40%高脂饲料（n=68）。建立老年肥胖大鼠模型,选取24只建模成功的肥胖大鼠随机分为4组（n=6）：肥胖对照组（CO）、白藜芦醇组（RO）、低强度运动+白藜芦醇组（LRO）、中强度运动+白藜芦醇组（MRO）。LRO组和MRO组的运动强度分别为（12 m/min×15 min）和（15 m/min×15 min）,每天运动60 min;补充白藜芦醇各组52.5 mg/kg·d灌胃1次,对照组采用等量的纯净水灌胃,持续干预8周。8周后采血和肾周、睾周、血管及内脏脂肪组织,检测血糖和血浆RBP4浓度、计算胰岛素敏感性（ISI）,检测RBP4 mRNA和蛋白表达。结果：与正常组比较,模型组大鼠RBP4 mRNA和蛋白表达、血浆浓度及血糖指标明显升高（P<0.05,P<0.01）,ISI明显降低（P<0.05）;与模型组比较,RO、LRO组和MRO组大鼠RBP4 mRNA和蛋白表达、血浆浓度及血糖指标明显降低（P<0.05,P<0.01）,ISI明显升高（P<0.05）;RO、LRO组和MRO组之间比较,MRO组大鼠RBP4 mRNA和蛋白表达、血浆浓度及血糖指标明显降低,ISI明显升高,但无显著差异。结论：不同强度运动结合白藜芦醇能降低老年肥胖大鼠内脏脂肪组织RBP4 mRNA和蛋白表达及血浆RBP4浓度,受运动强度影响较小。     

柳枯叶蛾生物学特性及防治的研究

<正> 柳枯叶蛾Bhima undulosa Walker属鳞翅目、枯叶蛾科。当地俗称老棕索,有的又叫黑毛虫。在云南中部地区(昆明、宜良、玉溪、楚雄、曲靖等地)普遍发生,主要为害柳树,有时也加害滇杨、桃树、刺槐、梅树、李树、柿树,严重者将树叶全部吃光。柳枯叶蛾不仅为害多种园林植物而且对人、畜也经常带来伤害。我们用了近三年的时间对其生物学特性和防治进行了观察、研究和实验,现将结果报告于下。     

NPTⅡ蛋白质在转基因水稻中的表达特征研究

nptⅡ编码新霉素磷酸转移酶,是转基因实验中最常用的筛选标记基因之一.本研究中,表达了重组新霉素磷酸转移酶(NPTⅡ)蛋白质,制备了单克隆抗体,建立了用免疫印迹检测转基因水稻中NPTⅡ蛋白质的方法,调查了NPTⅡ蛋白质的表达特征,包括遗传特征、表达时空特征、表达丰度和亚细胞定位等.结果表明,该方法可检测到单粒稻米的0.25%(约0.025 mg)样品中的NPTⅡ蛋白质,NPTⅡ的表达符合显性遗传规律,根据NPTⅡ的表达可对转基因T1代种子进行阴阳性及纯合株系的鉴定,对T1幼苗中NPTⅡ丰度的分析可为纯合单株的鉴定提供参考信息.定量分析表明苗期叶片中NPTⅡ蛋白质的含量约为鲜重的0.08‰.在Ca MV-35S启动子驱动下NPTⅡ蛋白质在水稻苗期、成株期的叶片和根部组织中表达量较高,而在分蘖期、孕穗期较低,NPTⅡ在不同时期的根、茎、叶、穗子、花及种子等组织中均有表达,只是在分蘖节、茎节、穗轴和花药等组织中表达量相对较低.此外,NPTⅡ蛋白质的表达主要定位在细胞质中.综上所述,本研究建立了具有应用价值的检测NPTⅡ蛋白质的免疫印记方法并系统揭示了其在水稻中的表达特征.     

自体骨髓间充质干细胞移植治疗难治性肝硬化腹水患者的临床疗效观察

目的观察自体骨髓间充质干细胞（BMSC）移植治疗肝硬化难治性腹水的疗效及安全性。方法对2010年9月至2013年9月入住南京总医院消化内科经正规利尿、补充白蛋白达3个月以上且疗效欠佳的32例肝硬化腹水患者,在原有治疗基础上加用自体BMSC移植治疗,分别于治疗前、治疗后1个月及3个月观察腹围、体重、24 h尿量、血清尿素氮、肌酐、尿钠及血清蛋白浓度等指标变化。采用方差分析、配对t检验和Wilcoxon检验进行统计学分析。结果治疗前,患者体重、腹围、24 h尿量及血清尿素氮、肌酐、血清总蛋白、血清白蛋白及尿钠排出水平分别为（66.9±3.8）kg、（94.0±3.6）cm、（966±138.7）ml、（10.5±3.6）mmol/L、（112.4±30.6）μmol/L、（63.8±4.2）g/L、（32.1±2.7）g/L、（43.8±2.3）mmol/L;治疗后1个月,分别为（66.0±3.9）kg、（93.0±3.6）cm、（1032±154.8）ml、（9.9±3.2）mmol/L、（104.8±25.6）μmol/L、（65.3±3.5）g/L、（32.6±2.9）g/L、（44.7±2.7）mmol/L;治疗后3个月,分别为（56.2±3.7）kg、（80.5±4.5）cm、（1530±180.6）ml、（7.9±2.3）mmol/L、（88.7±22.2）μmol/L、（72.8±3.3）g/L、（39.2±1.5）g/L。3个组别8个指标均数比较有统计学意义（F=78.194、117.689、120.527、6.558、6.712、54.827、83.421、493.776,均P=0.000）。治疗后1个月与治疗前水平差异无统计学意义（t分别为0.587、0.636、0.559、0.556、0.678、0.522、0.611、0.592;P=0.331、0.266、0.101、0.416、0.25、0.107、0.447）;而治疗后3个月,患者的体重、腹围较治疗前及治疗后1个月均明显减少,24 h尿量明显增加（与治疗前比较,t=3.722、3.784、3.821,与治疗后1个月比较,t=3.921、3.834、3.944,均P=0.000）,血清尿素氮、肌酐水平较治疗前及治疗后1个月均明显下降;而血清总蛋白、白蛋白及尿钠排出水平均明显升高（与治疗前比较,t=2.182、2.338、2.182、2.412、2.136,P尿素、肌酐=0.001,其余P     

汉中市汉台区无症状儿童幽门螺杆菌感染率的流行病学调查

目的 研究陕西省汉中地区无症状儿童幽门螺杆菌（H. pylori）感染的流行病学特点及其影响因素。方法 采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测2013年1月至2018年1月间我院328例无消化道症状儿童Hp-IgG水平情况,分析其流行病学特点,并行问卷调查研究幽门螺杆菌感染的影响因素。结果 328例无消化道症状儿童H. pylori感染率为18.90%。其中男童169例,感染率21.89%;女童159例,感染率15.72%;城市儿童137例,感染率20.44%;农村儿童191例,感染率17.80%。经Logstic回归分析,年龄3~4岁、饭前便后洗手、父母具有大学文化水平均为H. pylori感染的保护性因素;啃手指、公用洗漱杯、直系亲属胃病史均为H. pylori感染的独立危险因素,差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 H. pylori感染在儿童中较为常见,生活中不良习性与H. pylori感染密切相关。H. pylori感染相关高危因素的分析对于儿童H. pylori感染的防控具有重要临床意义。     

Q型烟粉虱为害对不同品种辣椒保护酶活性及次生物质含量的影响

【目的】探明辣椒品种对烟粉虱Bemisia tabaci的抗性机制。【方法】对Q型烟粉虱为害辣椒后不同抗性品种的保护酶活性和次生物质含量进行了测定。【结果】Q型烟粉虱取食辣椒后,不同品种叶片SOD、POD活性及总酚、总黄酮含量存在显著差异。成虫取食后,6个品种辣椒的SOD活性均升高,除了感虫品种港上红尖椒外,其余5个品种的SOD活性均与对照存在显著差异。抗虫品种(苏椒5号和新研988椒王)、中等抗虫品种(萧新九号和湘辛三号)的POD活性明显增强,而感虫品种(港上红尖椒和大禹牛角王)的POD活性明显降低。从SOD、POD活性变化值来看,抗虫品种最大,中等抗虫品种次之,敏感品种最小。Q型烟粉虱为害辣椒后,大多数品种叶片总酚和总黄酮含量均显著升高。总酚含量以抗虫品种苏椒5号明显高于其他品种。从总黄酮含量变化值来看,抗虫品种反而较敏感品种较小。【结论】供试6个不同品种对Q型烟粉虱的抗性强弱与辣椒叶片SOD、POD活性、总酚含量有关,而与总黄酮含量无明显相关。