胎膜来源的间充质干细胞促进烧伤愈合的研究

目的:研究胎膜来源的间充质干细胞在治疗SD大鼠Ⅲ度烧伤中的作用.方法:用胰酶消化法分离足月产胎膜细胞,加入Amino-MAX Ⅱ培养基进行培养.流式细胞仪检测细胞表面标志物CD29、CD73、CDl4、CD45.分别用浓度为3mg/ml、5mg/ml、7mg/mi、9mg/ml的明胶溶液包被脱细胞真皮(ADM),以5x 106/ml的密度将细胞种植在包被和未包被的ADM表面,2小时后收集未贴附在ADM上的细胞,计算细胞种植效率.实验组:以7mg/ml的明胶包被ADM,以5x 106/ml的密度种植第2～3代细胞,培养3～5天后,移植至SD大鼠Ⅲ度烧伤创面;对照组Ⅰ移植单纯的ADM,对照组Ⅱ未进行移植,术后定期观察创面大体情况,计算创面收缩率、表皮再生面积比例,第5周切取新生皮肤组织行HE染色.结果:胎膜分离的细胞以长梭形为主,表达与间充质干细胞相关的表面抗原标志物CD29、CD73,极少表达造血细胞标志物CD14、CD45.不同浓度明胶溶液包被和未包被的ADM,其细胞种植效率均无明显区别(P>0.05);相比对照组,实验组移植物成活时间更长,创面再上皮化时间较早,创面收缩率较小,再生表皮面积亦较多(P<0.05);再生表皮更厚,有明显的表皮突,真皮层毛细血管丰富.结论:成功分离、培养了胎膜来源的间充质干细胞.胎膜来源间充质干细胞复合ADM可促进SD大鼠Ⅲ烧伤创面表皮再生,加速创伤愈合,抑制创面收缩.     

以人皮肤成纤维细胞作为饲养层细胞培养人胚胎干细胞

目的：比较人皮肤成纤维细胞（humandermalfibroblasts,HDFs）与小鼠胚胎成纤维细胞（Mouseembryonicfibroblasts,MEFs）的增殖能力及研究人皮肤成纤维细胞作为饲养层支持人胚胎干细胞（humanembryonicstemcells,hESCs）未分化生长的能力。方法：利用组织贴壁法从人皮肤中分离出HDFs,通过细胞形态的观察和生长曲线的绘制比较HDFs与MEFs的体外增殖能力。将HDFs作为饲养层细胞与hESCs共培养,传代12代后,检测hESCs碱性磷酸酶（AKP）、表面特异性标志及胚胎干细胞特异性转录因子。结果：HDFs可连续传代培养15代以上,10代以下的HDFs增殖迅速,而MEFs自第4代起,增殖能力就明显下降;hESCs在HDFs饲养层上可传代培养12代以上,克隆边界清晰,细胞排列紧密,碱性磷酸酶、表面标志物检测均呈阳性,表达了hESCs特异性转录因子。结论：HDFs比MEFs具有更强的增殖能力;HDFs可作为培养hEscs的饲养层细胞。     

真核细胞中多重表达框mRNA的选择性翻译起始

扫描模型和遗漏扫描模型是真核生物mRNA翻译起始的两种主要机制,但其仍存在某些例外情况,如对具有多顺反子结构的mRNA,选择性翻译起始的发生机制目前仍不清楚.本研究基于GFP蛋白开放表达框(ORF)构建了一系列重组表达载体,用以转录在移码翻译顺序及同一翻译顺序下,AUG起始密码子处于不同序列背景,以及间隔不同距离的多顺反子结构mRNA.通过转染人Bel 7402细胞系,研究了这些多顺反子结构mRNA的翻译起始模式.结果表明,在移码翻译顺序下,多顺反子mRNA可翻译出对应的不同蛋白质,而在同一翻译顺序下,GFP蛋白表达框中的多个AUG密码子,仅有首位起始密码子可发挥作用,提示核糖体在从首位起始密码子开始翻译的同时,可能会有部分核糖体继续向下扫描并识别下游的起始密码子,而这种选择性的翻译起始效率,主要取决于密码子所处的序列背景及间隔距离等因素.