骨髓间充质细胞联合PDMS支架构建移植胰岛微环境的实验研究

目的为了提高移植胰岛的活性和功能,构建适合移植胰岛生存的微环境。 方法采用聚二甲基硅氧烷（PDMS）和氯化钠晶体构建三维支架,联合骨髓间充质细胞（MSCs）、纤维蛋白和胰岛共同构建迷你"人工胰腺"。采用链脲佐菌素（STZ）诱导的糖尿病大鼠移植模型评价效果,将"人工胰腺"移植到糖尿病大鼠大网膜内,对照组行假手术,术后隔天监测移植大鼠血糖水平;数据采用t检验和曼-惠特尼U检验。 结果用PDMS构建的三维巨孔支架,支架内可见大量不规则孔洞空间。胰岛和MSCs可成功装载入支架内,HE染色结果显示,支架孔内存在胰岛,胰岛周围包绕有MSCs。糖尿病大鼠大网膜内移植结果显示,移植后各时间点（1,3,5,7 d）,"人工胰腺"移植组糖尿病大鼠血糖水平分别为（278.70±86.06）mg/ dl、（323.50±44.29）mg/ dl、（283.30±74.00）mg/dl、（304.80±13.33）mg/dl,较假手术对照组（606.00±52.40）mg/dl、（589.70±55.78）mg/dl、（615.00±54.84）mg/dl、（630.30±48.17）mg/ dl均降低,差异具有统计学意义（t = 7.96、9.15、8.82,U = 0.00,P均< 0.01）。 结论MSCs联合PDMS三维支架构建的微环境,可为移植胰岛提供生存的环境,为临床开展胰岛移植提供新的策略。     

成人胰岛细胞移植25例次临床研究

目的 建立新型成人胰岛细胞分离纯化方法,观察成人胰岛细胞移植的安全性与有效性.方法 对14例1型糖尿病(T1DM)患者进行PFC与UW液双层冷藏胰腺,Liberase酶消化,COBE 2991型专用胰岛细胞分离机分离及连续密度梯度纯化,获取高纯度与高活性的胰岛细胞.采用外科方法,将短期培养的胰岛细胞经门静脉移植到肝脏内...     

补骨脂素抑制膀胱癌T24细胞增殖和迁移的作用及机制研究

目的探讨补骨脂素对人膀胱癌T24细胞存活率、细胞周期、细胞凋亡和迁移的影响及其分子机制。 方法分别用细胞培养液、3‰二甲基亚砜（DMSO）和不同浓度（10、30、50、100 μg/mL）补骨脂素处理膀胱癌细胞分成对照组、DMSO组和补骨脂素组,CCK-8检测细胞存活率。流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡。划痕实验检测划痕愈合率。RT-qPCR法检测磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）和蛋白激酶B （AKT） mRNA表达水平、Western blot法检测PI3K和AKT蛋白的表达及磷酸化情况。多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验。 结果与DMSO组比较,除10 μg/mL补骨脂素作用24 h外,其余浓度补骨脂素作用不同时间的细胞存活率随着补骨脂素浓度增高、作用时间延长而逐渐降低（P < 0.05）。与DMSO组比较,30、100 μg/mL补骨脂素干预24 h后,G1期细胞比例增多,G2/M期比例减少,细胞凋亡率[（9.16±0.97）%、（15.45±1.57）%比（1.02±0.36）%]升高,划痕愈合率[24 h：（45.00±3.44）%、（27.60±2.21）%比（66.10±2.61）%,48 h：（70.00 ± 3.40）%、（45.17±2.44）%比（85.17±3.85）%]降低,PI3K、AKT mRNA表达以及PI3K、AKT蛋白表达水平和磷酸化水平均降低（P均< 0.05）。 结论补骨脂素降低膀胱癌细胞存活率、阻滞细胞周期、诱导细胞凋亡和抑制细胞迁移,其机制可能与下调PI3K、AKT mRNA、蛋白表达及磷酸化水平有关。     

骨髓间充质干细胞对移植肾缺血再灌注损伤保护作用的实验研究

目的 观察骨髓间充质干细胞（MSCs）对移植肾缺血再灌注损伤（IRI）模型修复的保护作用,及其作用机制的思路。方法 （1）采用密度梯度离心法结合贴壁分离法分离培养纯化SD大鼠骨髓MSCs,观察其形态,流式细胞仪检测细胞表面标记,检测骨髓MSCs向成骨和成脂细胞分化的潜能;（2）成年雌性SD大鼠28只,随机分组：正常对照组（control group,n=6）,假手术对照组（sham-operated group,n=6）,移植肾IRI组（vehicle-treated I/R group,n=8）,经尾静脉输注间充质干细胞（MSCs）移植肾IRI组（MSCs-treated via tail vein I/R group,n=8）。检测肾功能指标血尿素氮（BUN）和肌酐（Cr）水平变化,评定肾小管的凋亡指数和增殖指数,测定肾组织起氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性及微量丙二醛（MDA）水平,以及对肾脏病理学变化进行观察。结果 （1）分离培养的骨髓MSCs纯度高、生物学特征稳定;（2）移植肾IRI组肾功能指标（BUN36.9±4.8,Scr279.9±22.6）、氧化应激指标明显升高,组织形态学出现肾间质水肿明显,肾小管上皮细胞空泡样变性,近曲小管管壁肿胀,管腔变小。而经尾静脉输注MSCs移植肾IRI组大鼠肾功能指标（BUN22.6±7.8,Scr223.6±26.7）和氧化应激指标得到明显改善（P〈0.05）,组织形态学肾小管上皮细胞细胞核固缩、碎裂和溶解等细胞坏死和变性征象明显减轻,肾小管上皮细胞增殖指数（PI）高于IRI组,肾小管上皮细胞凋亡指数（AI）低于IRI组,两组间差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 骨髓MSCs输注能促进肾脏IRI损伤后肾脏细胞增殖,抑制肾脏细胞凋亡,降低血清Creatinine和BUN,在一定程度上促进IRI后肾功能的恢复,通过抑制氧自由基的生成减轻肾组织的损伤程度,改善肾功能。     

补骨脂素对前列腺癌LNCaP-AI细胞增殖和周期调控及雌激素受体β表达的影响

目的探讨补骨脂素对前列腺癌LNCaP-AI细胞增殖的影响,并初步探索其可能的作用机制。 方法不同浓度补骨脂素处理体外培养的前列腺癌LNCaP-AI细胞,采用CCK-8法检测各组的细胞增殖变化,Western blot法检测各组细胞Ki67蛋白表达,流式细胞术检测各组细胞周期的变化,实时定量RT-PCR法检测各组细胞雌激素受体β（ERβ）mRNA的表达。组间均数比较均采用单因素方差分析。 结果CCK-8检测结果显示,补骨脂素对LNCaP-AI细胞增殖的抑制呈浓度—时间依赖性增强。Western blot法、流式细胞术和实时定量RT-PCR检测结果分别显示,不同浓度补骨脂素（30,50,100 μg/ml）处理48 h后,随着药物浓度的增加,LNCaP-AI细胞的Ki67蛋白表达明显降低,分别为27.82±0.55、25.27±0.62、23.93±0.50和22.54?±0.59（F = 28.59,P < 0.01）;G1期分别为72.14±0.5、74.57±1.22、78.12±0.92、79.36±0.49和80.6?±1.42（F = 38.26,P < 0.01）;G2期分别为27.57±0.5、23.2±1.39、16.41±1.23、12.23±1.3和7.47±1.03（F = 216.63,P < 0.01）细胞均随之增多,而S期细胞则随之减少,分别为0.29±0.07、2.23?±0.32、5.47±0.44、8.41±0.95和11.93±0.57（F = 153.58,P?< 0.01）;ERβ mRNA的表达量明显升高,分别为1±0 、2.197±0.225、4.573±0.346和6.590±0.334（F?= 264.09,P < 0.01）。 结论补骨脂素具有抑制前列腺癌LNCaP-AI细胞增殖和Ki67表达的作用,其机制可能与其将细胞阻滞于G1、G2期和上调ERβ mRNA的表达有关。