前列腺特异膜抗原在Pichia pastoris酵母中的表达及鉴定

前列腺特异膜抗原是一种具有高度前列腺特异性的糖蛋白 ,其表达的增高与肿瘤的术后复发、激素抵抗及较差的预后正相关 ,在前列腺癌的诊断和治疗中有广泛的应用前景 .从前列腺癌组织提取总RNA ,利用RT PCR技术获得PSMA基因的全长序列 ,构建了重组酵母表达载体pPIC3.5K PSMA .电击法转化Pichiapastoris酵母 ,通过表型筛选和PCR鉴定证实该基因已稳定整合入Pichiapastoris酵母基因组中 .SDS PAGE显示 ,获得的PSMA蛋白分子量约 10 0kD ,表达产物经West ern印迹证实可特异地与PSMA单克隆抗体 4G5结合 .结果表明 ,成功地获得PSMA编码的cDNA并在酵母细胞中获得表达 .     

糖尿病性高血压大鼠肾损害相关基因cDNA片段的克隆与初步鉴定

为筛选大鼠糖尿病性高血压病所致的肾损害相关基因,自发性高血压大鼠以STZ 50 mg/kg一次性尾静脉注射,建立糖尿病性高血压大鼠模型,4周后该模型大鼠尿蛋白持续阳性,电镜观察到肾小球基质增生、足突融合或扁平.应用荧光标记的差异显示反转录聚合酶链反应(DDRT-PCR)及RNA印迹技术,比较两种模型大鼠肾皮质的基因表达差异,并进行差异条带的cDNA序列生物信息学分析.其中4个差异条带与Genbank数据库比较,2个为未知基因,2个为已知基因,即成淀粉样糖蛋白（amyloidogenic glycoprotein,AGG）、CDK109,两者可能与糖尿病性高血压肾损害的发生相关,对它们的进一步研究将为肾损害发病机理的发现提供思路.     

肿瘤坏死因子家族的新成员——TRANCE

肿瘤坏死因子相关激活诱导因子 (ＴＮＦ ｒｅｌａｔｅｄａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｉｎｄｕｃｅｄｃｙｔｏｋｉｎｅ ,ＴＲＡＮＣＥ)是肿瘤坏死因子家族的一个新成员 ,人ＴＲＡＮＣＥ基因首先由Ｗｏｎｇ等克隆 ,它是一种完整的Ⅱ型转膜糖蛋白 ,由 316个氨基酸组成 ,胞外区与同是ＴＮＦ家族成员的ＴＲＡＩＬ、ＦａｓＬ和ＴＮＦ等有较高的同源性 ,ＴＲＡＮＣＥ表达的蛋白质是免疫系统、骨的发生和保持平衡的重要调节因子 .最近 ,Ｎａｇａｉ等通过 5′ ＲＡＣＥ法获得了分泌型的ＴＲＡＮＣＥ (ｓＴＲＡＮＣＥ ,ｓｅｃｒｅｔｅｄｆｏｒｍＴＲＡＮＣＥ…     

人前列腺特异膜抗原膜外区基因的克隆表达及抗体的制备

利用RT PCR技术 ,从前列腺癌组织总RNA中扩增人前列腺特异膜抗原 (PSMA)基因编码区序列 ,克隆至pcDNA3.1载体 ,以此为模板再次PCR扩增出PSMA膜外区cDNA(edPSMA) ,序列测定表明克隆获得的PSMA及edPSMA与基因库所登录的序列相一致。构建原核表达质粒pMAL c2x edPSMA ,经IPTG诱导表达的MBP edPSMA融合蛋白分子量约 12 0kD ,Westernblot证实表达产物可特异地与PSMA单克隆抗体 4G5结合。用直链淀粉琼脂糖凝胶 (Amyloseresin)亲和层析纯化蛋白质可得到电泳均一的融合蛋白 ,免疫BALB C小鼠制备多抗 ,获得效价为 1∶12 80 0的多克隆抗体 ,该抗体可用于前列腺癌组织标本PSMA表达的检测