重组人胰岛新生相关蛋白的高水平表达与纯化

通过RT-PCR体外扩增目的基因胰岛新生相关蛋白(islet neogenesis associated protein,INGAP),并将其克隆入原核表达载体pET22b(+),在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达.表达的目标蛋白主要以包涵体形式存在,洗涤杂蛋白后用尿素溶解,经Heparin Agrose亲合柱层析分离后,再用Superdex75凝胶过滤层析进一步纯化.纯化后的INGAP皮下注射免疫家兔,制备兔抗INGAP血清,采用免疫双扩、ELISA评价INGAP的免疫活性.结果显示INGAP表达量高达菌体总蛋白的40%左右,经HPLC测定,分离纯化后的目标蛋白纯度达到98.81%,且具有良好的免疫原性.     

外周血晚期糖基化终产物、外周血锌转运蛋白8与糖尿病脂代谢紊乱的相关性

摘要 目的：探讨外周血晚期糖基化终产物(the Receptor of Advanced Glycation Endproducts,RAGE)、外周血锌转运蛋白8(Zinc transporter 8,ZnT8)与糖尿病脂代谢紊乱的相关性。方法：2015年8月到2020年9月选择在本院诊治的2型糖尿病患者118例作为糖尿病组,同期选择在本院体检的健康人118例作为对照组。检测两组外周血RAGE、ZnT8、脂代谢水平,调查患者的一般资料并进行相关性分析。结果：糖尿病组的血清RAGE、ZnT8含量都高于对照组(P<0.05)。糖尿病组的甘油三酯(Triglycerides,TG)、总胆固醇(Total cholesterol,TC)、低密度脂蛋白(Low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、视黄醇结合蛋白4(Retinol binding protein 4,RBP4)、游离脂肪酸(Free fatty acid,FFA)含量高于对照组(P<0.05),高密度脂蛋白(High density liptein cholesterol,HDL-C)、脂联素(Adiponectin,APN)含量低于对照组(P<0.05)。在糖尿病组中,Pearson分析显示RAGE、ZnT8与TG、TC、LDL-C、APN、HDL-C、FFA、RBP4都存在相关性(P<0.05)。多因素logistic回归分析显示RAGE、ZnT8、TG、TC、LDL-C、APN、HDL-C、FFA、RBP4都为影响患者空腹血糖的重要因素(P<0.05)。结论：糖尿病患者的外周血RAGE、ZnT8多呈高表达状况,也多伴随有脂代谢紊乱,RAGE、ZnT8与脂代谢指标存在相关性,也可共同参与调节糖尿病的发生与发展。     

重组人胰岛新生相关蛋白的表达、纯化及免疫活性研究

摘要 目的：对胰岛新生相关蛋白（Islet neogenesis associated protein ,INGAP）进行表达、纯化,并检测其免疫活性。方法： INGAP基因片段插入表达载体pET22b(+),在E.coli BL21(DE3)中表达。包涵体经洗涤并用8M尿素溶解,Heparin Agrose亲合柱层析为第一步纯化,Superdex75凝胶过滤层析作为第二步精细纯化,HPLC测定INGAP蛋白的浓度,将纯化的INGAP蛋白经注射途径免疫家兔,制备兔抗INGAP血清,采用免疫双扩、ELISA及Western Blot分析INGAP的免疫活性。结果INGAP以包涵体形式表达,表达产量高达总菌体蛋白的40%左右,经Heparin Agrose亲合柱层析和凝胶过滤层析二步组合纯化目的蛋白,经HPLC测定目的蛋白的最终纯度为98.81%,表达及纯化的INGAP具有良好的免疫活性。