多肽酰胺化酶的结构与功能

C端酰胺化是许多神经内分泌多肽重要的翻译后加工过程,是在酰胺化酶的催化下分两步进行的,PHM和PAL分别催化这两步反应.PHM由两个结构相似的结构域组成,每个结构域均为九链β折叠组成的三明治样结构,分别由三个His或两个His和一个Met螯合一个Cu组成活性中心.在一个反应周期中,两个Cu分别独立地与抗坏血酸和分子氧发生单电子传递的氧化还原反应,最后完成多肽底物的α-碳的羟化反应.     

菌体表面表达与活菌疫苗

展示表达是将目的蛋白基因与细胞表面结构蛋白融合,使目的蛋白表达并锚定于细胞表面的一项技术,微生物特别是细菌常用作展示表达的宿主。在大肠杆菌中,多种外膜蛋白、鞭毛蛋白、菌毛蛋白、脂蛋白等均已被用于表达和锚定外源蛋白,革兰氏阴性菌中,较明确的是蛋白Ａ可用以细胞表面的整合,Ｍ６蛋白也被尝试用于乳酸菌的展示表达,酵母表达体系中,将目的蛋白与凝集素融合可表达细胞表面,菌体表面表达的蛋白容易被免疫系统识别,能引起强烈的免疫反应。其中沙门菌、大肠杆菌、链球菌等展示表达的致病细菌或病毒的抗原和毒素用于免疫动物均能产生高滴度的中和抗体,用作疫苗大有前途。本文对表达体系和在疫苗方面的应用进行了概述     

降钙素／降钙素基因相关肽基因前体RNA的加工

降钙素和降钙素基因相关肽是由一个基因表达出的两种功能完全不同的多肽激素,其基因的表达主要在ＲＮＡ水平上受到调控,前体ＲＮＡ在加工成为成熟ＲＮＡ的过程中,在不同的组织中经过不同的剪接形成不同的ＲＮＡ。其剪接的特异性受到顺式元件和反式因子的调控,基因的ｅｘｏｎ４上游剪接受点和下游ｐｌｏｙＡ位点均存在弱的加工位点,通过增强子序列使之产生选择性剪接,另外,可能存在组织特异的反式剪接因子。     

重组鲑鱼降钙素前体多肽的制备及其性质研究

硫氧还原蛋白的第 38位 Met突变为 Ala的 Trx- s CT- Gly基因在 E.coli BL2 1 ( DE3)中得到高效表达 .用 Thio Bind亲和树脂纯化表达的融合蛋白 .结果说明 38位的 Met突变为 Ala不影响融合蛋白与树脂的特异性结合 ,融合蛋白的纯度达 90 %以上 .在含有 3mol/L尿素的 70 %甲酸中 ,室温 48h,至少 80 %融合蛋白被溴化氰裂解开 .采用 CM-纤维素吸附 ,用稀盐酸解吸附 ,得到纯度为92 %的降钙素前体多肽 s CT- Gly.氨基酸的序列分析结构表明 ,重组 s CT- Gly的 N端 1 0个氨基酸与预期一致 .在强酸性条件下 ,没有发生氨基酸的脱酰胺反应 ,氨基酸组成分析与预期基本一致 .质谱法测定的分子量为 3492 ,毛细管电泳测定的等电点 p I为 6.46,大鼠降钙素比活性为 1 90 IU/mg左右 ,与天然的人降钙素相当 .