人D6S1043-1型STR质粒DNA标准物质的研制

短串联重复序列（short tandem repeat，STR）是存在于人类基因组中的一类具有长度多态性的DNA序列，由含2~6个碱基对的重复单位串联构成。DNA STR分型检验是当前法庭科学进行个体识别和亲缘鉴定的主要依据。STR分型标准物质是DNA STR检验量值溯源的基础和关键物质，对其进行研究将极大推动我国法庭科学DNA STR检验的标准化进程。以STR基因座D6S1043为例，介绍人类基因组中STR序列的质粒DNA标准物质的制备过程。首先，合成包含13个重复单元（\[ATCT\]13）的D6S1043序列（定义为D6S1043-1）并将其与pUC57载体连接构建重组质粒，制备质粒溶液。其次，通过酶切鉴定、Sanger测序、多种STR分型试剂盒的分型鉴定等方法检验DNA序列的准确性。再次，采用微滴式数字PCR方法（droplet digital PCR，ddPCR）检测质粒浓度，评估质粒溶液的均匀性和稳定性。最后，由8家实验室协作，测定浓度标准值，综合分析均匀性检验、稳定性检验、定值过程等引入的不确定度，得到总不确定度；由6家实验室协作，测定D6S1043-1的分型值。结果表明：该标准物质的均匀性、稳定性良好，在-20 ℃可保存6个月，在4 ℃可保存14 d；核酸拷贝数为（7.7±1.2）×103 copies·μL-1；在D6S1043基因座上的分型值为13。人D6S1043-1型STR质粒DNA标准物质 \[编号：GBW（E）091072\] 是我国法庭科学DNA检验领域首批有证标准物质之一，其研制过程为其他STR基因座的质粒DNA标准物质的研制提供了一定的借鉴。