水杨酸诱导美登木悬浮细胞产生脂氧合酶及多羟基脂肪酸的研究

水杨酸 (SA)可诱导云南美登木 (Maytenushookeri)悬浮培养细胞产生 9 脂氧合酶(9 lipoxygenase ,9 LOX)。通过LC ESI MS测定SA诱导下悬浮培养系中多羟基脂肪酸的含量变化 ,发现用浓度为 80 0 μmol L的SA诱导培养 18h ,悬浮细胞产生最大量的三羟基十八碳烯酸。同时 ,通过对比不同羟基十八碳烯酸含量的变化 ,推测在SA诱导下 ,9 LOX介导的十八碳酸途径中有环氧中间体的生成。     

小桐子甘油-3-磷酸酰基转移酶（JcGPAT）cDNA的克隆与序列分析

甘油-3-磷酸酰基转移酶是植物生物合成储存油脂过程中的关键酶,对油料作物种子含油量具有重要的限制作用。本研究以植物甘油-3-磷酸酰基转移酶同源基因的保守区域序列为基础,设计简并引物,结合RACE技术,从能源植物小桐子种子中克隆获得JcGPAT基因的cDNA全长序列（GenBank登录号HQ395225）。JcGPAT cDNA核苷酸序列长度为1672bp,开放阅读框为1125bp,编码375个氨基酸。该基因具有明显的GPAT基因结构域,其编码的氨基酸序列与油桐、蓖麻等植物具有很高的同源性。RT-PCR表达分析表明,该基因在小桐子发育的种子、叶、根尖等多个组织表达。     

樟叶越桔熊果苷合成酶基因VdAS1的克隆及序列分析

根据樟叶越桔(Vaccinium dunalianum)叶芽转录组测序获得的熊果苷合成酶基因Vd AS1部分EST序列设计引物,结合RACE-PCR技术获得Vd AS1基因全长1 577 bp c DNA序列。其完整的开放阅读框推测编码由475个氨基酸残基组成的Vd AS1蛋白,理论相对分子量为52.22 k D,等电点p I=5.74,负电荷残基(Asp+Glu)总数为53个,正电荷残基(Arg+Lys)总数为45个,不稳定系数为37.93,属稳定性蛋白质。生物信息学分析表明Vd AS1与枸杞的糖基转移酶相似率高达74%,其二级结构主要构件为α-螺旋和随机卷曲,不存在跨膜区,属于亲水性蛋白质,并结合信号肽预测结果推测Vd AS1直接锚定在细胞基质中行使功能。该研究为后期Vd AS1的异源表达和功能研究奠定了基础。     

天麻抗真菌蛋白对木霉菌丝的作用位点

天麻抗真菌蛋白(Gastrodia Antifungal Protein,GAFP)能强烈抑制腐生真菌菌丝的生长,在天麻限制和防止蜜环菌[Armillariella melles (Vahl.ex Fr.) Karst.]侵染球茎的防卫机制中起重要作用。本文报告GAFP抗菌机理研究的部分内容——GAFP对木霉菌丝的作用位点。用荧光试剂异硫氰酸荧光素(Fluorescein isothiocyanate,FITC)标记GAFP,试验表明,标记后的GAFP与未标记的GAFP对木霉菌丝生长均有抑制作用。在荧光显微镜下观察GAFP在木霉菌丝上的作用位点,发现被“标记GAFP”作用后的菌丝边缘有荧光,并主要集中在木霉菌丝的顶端和菌丝横隔处,表明GAFP对木霉的作用位点在菌丝的细胞壁上。     

天麻多肽的分离纯化研究

目的：研究生物多肽对生物机体的生命活动有益或生理作用。方法：对天麻（Gastrodiae elata B1．）初提液两次超滤（3kDa和1kDa超滤膜）,凝胶过滤和快速蛋白液相色谱（FPLC）分离纯化,以及反相高效液相色谱（RP-HPLC）对目标肽进行分析检测。结果：由Sephadex G-15葡聚糖凝胶柱层析分析肽液,得到各肽组分的相对分子质量分布范围。FPLC和RP-HPLC分析第二峰结果表明,此多肽组分分别只由一种肽组成。结论：此多肽相对分子质量在2500Da左右,具有很好的亲水性。     

马槟榔甜味蛋白的研究—Ⅲ.在种子中储存的位点和状态

甜蛋白mabinlin是马槟榔(Capparis masaikai Levl.)种子的主要储存蛋白。它位于胚轴细胞的蛋白体中,其含量为蛋白体总蛋白的90％。圆形蛋白体直径约2—10μm,内含许多球粒体(globoid),但无类晶体(crystalloid)。作为一种强碱性清蛋白,甜蛋白与一种强酸性化合物2-羟乙基葡硫甙磺酸(2-hydroxy-ethyl-glucosinolate)结合为可溶性盐,组成蛋白体的衬质(matrix)。衬质中还有酸性磷酸酯酶。球粒体无一定大小,主要含植酸钾盐。当种子或种子脱脂干粉在水中匀浆时,大部分甜蛋白与植酸结合为沉淀而不能被提取。但甜蛋白-植酸复合物溶于大于0.5N的氯化钠溶液。这容易引起以为种子主要储存蛋白是球蛋白的假象。在水浸泡的完整种子中,部分甜蛋白从蛋白体中渗出,部分与植酸结合而后逐步释放,受到进一步降解。     

马槟榔甜味蛋白N-和C-末端部分氨基酸顺序的测定

从马槟榔(Capparis masaikai)种子中曾分离出二种甜味蛋白,称为Mabinlin Ⅰ和Ⅱ,分子量分别为11.6kD和10.4kD。用Edmail降解和反相HPLC鉴定PTH-aa方法测定证明:二者的N末端均因焦谷氨酸环化而封闭。采用1mol/l HCl-甲醇溶液35℃处理24小时的方法可使之开环。二种蛋白N端肽8个氨基酸残基顺序均为:Pyroglutamic acid-Pro-Arg-Gly-Pro-Ala-Leu-Arg-。羧肽酶酶解的动态分析证明MaI羧端的氨基酸顺序为-Phe-Gln-Leu-Ala-Ser,MaⅡ为-Phe-Gln-Leu-Ala。其差别仅在于MaⅡ缺一个Ser,这一结果表明MaⅠ和MaⅡ的主要差异不是在端肽。     

麻疯树种子发育过程中JcOle14.3和JcOle16.6基因的表达模式研究

油质蛋白基因对种子中油体的形成至关重要,该研究通过实时荧光定量PCR,对麻疯树的两个油质蛋白基因JcOle14.3和JcOle16.6在种子不同发育时期的表达模式进行了分析。结果表明:两个基因在种子发育初期(10~30 d)表达量逐渐升高,但表达水平均较低;40 d时表达量急剧增加并达到最高,而种子发育后期(50~55 d)两个基因表达水平均逐渐降低。由此可初步推测,JcOle14.3和JcOle16.6基因的表达量可能与种子油脂积累量存在正相关。该研究结果为麻疯树油体形成机理和油质蛋白的深入研究提供了理论基础。     

天麻蛋白质的双向电泳和肽质量指纹谱分析与鉴定

采用双向聚丙烯酰胺凝胶电泳和质谱技术对天麻染菌球茎皮层和不染菌的新生球茎皮层进行了比较蛋白质组分析与鉴定。双向电泳后在分子量 1 2～97kD、等电点 3～ 1 0范围内 ,每块胶分离到约 90 0个蛋白质点。对新生球茎中表达量明显增加的 5个蛋白质点用基质辅助激光解吸 电离飞行时间质谱 (MALDI TOFMS)进行肽质量指纹谱的分析 ,并通过检索不同的数据库进行蛋白质鉴定与功能预测 ,初步认为第 4号蛋白点是一个与转录有关的RNA结合蛋白。同时本文在天麻蛋白质组样品制备、数据库检索策略以及蛋白质鉴定成功率等方面进行了探讨。