鸡血清与卵黄中抗中华眼镜蛇毒IgY动态变化研究

目的探索特异性IgY的产生和变化规律。方法用眼镜蛇毒原毒免疫产蛋母鸡,ELISA定期检测卵黄中的抗体效价变化,小鼠体外中和实验检测其生物活性。第1次免疫40周后,眼镜蛇毒攻击已免疫母鸡,检测攻击前后鸡血清中抗体效价变化情况,未经眼镜蛇毒免疫的母鸡作阴性对照。结果经免疫后第7天蛋黄中即可检测到抗体,经多次加强免疫,40周时蛋黄中还能保持高效价的抗体,通过分离纯化,此抗体可保护实验小鼠免受4 LD50眼镜蛇毒的攻击;同时,鸡血清中也保留着较高效价的抗体,可中和4 LD50以上的眼镜蛇毒。结论用眼镜蛇毒免疫鸡,经多次加强免疫,卵黄和鸡血清中可持久保持高效价的特异性抗体,初步检测此抗体可中和4 LD50的蛇毒。     

抗中华眼镜蛇毒鸡卵黄抗体的制备及其效价测定

目的探索免疫鸡制备高效价抗眼镜蛇毒抗体的新方法。方法用中华眼镜蛇原毒作抗原免疫22周龄的莱航母鸡,水溶法粗提抗体,DEAE Sepharos FF柱纯化,切向流超滤膜脱盐及浓缩,免疫电泳及双向免疫扩散法进行鉴定及效价测定,采用BCATMProte in Assay K it测定蛋白含量。结果鸡卵黄经水溶法的粗提物与中华眼镜蛇毒即有较明显沉淀反应,其效价随着纯度的提高而增强。将马源性抗血清的蛋白质含量调至与浓缩的IgY相同(2mg/m l),经双向免疫扩散及免疫电泳鉴定,该抗体不但对中华眼镜蛇毒有特异性结合,与孟加拉眼镜蛇毒亦有较强的交叉免疫活性,其效价较马抗眼镜蛇毒血清高4倍以上。结论用中华眼镜蛇原毒制备的IgY抗体,其效价较马抗血清有显著提高,并与孟加拉眼镜蛇毒有高度交叉免疫。本实验为抗眼镜蛇IgY的应用及其它抗蛇毒IgY的制备奠定了基础。     

中华眼镜蛇伤大鼠模型多项电生理指标的动态观察

目的建立中华眼镜蛇毒挑战剂量的大鼠模型,通过对多项电生理指标的动态观察,为蛇毒毒理及抗蛇毒制剂的研究提供实验数据。方法将SD大鼠分为蛇毒组、血清保护组和对照组,戊巴比妥腹麻,连续记录心率、血压、呼吸频率及心电图等电生理指标的动态变化,观察眼镜蛇毒的毒性反应及抗蛇毒血清对动物的保护作用。结果腹腔注入挑战剂量(4×LD50:4×0.636 mg/kg)的中华眼镜蛇毒后,大鼠平均生存时间为(3±0.33)h。蛇毒组给药30~60 min后,心率及呼吸频率均有轻度加快,Ⅱ导联ST段抬升幅度超过同期正常对照0.1 mV以上(P<0.05);130~150 min后,心率、呼吸频率及动脉血压均直线下降;达180 min时,心率、呼吸频率及动脉血压均已降到同期正常对照的30%以下,差异非常显著(P<0.01)。血清保护组给药后各指标相对平稳,与对照组比较无明显差异。结论以4倍LD50为挑战剂量造模的中华眼镜蛇伤大鼠模型,心率、血压、呼吸频率及心电图等电生理指标的动态变化与临床症状基本相符。眼镜蛇毒抗血清可有效地中和、保护眼镜蛇毒对机体的伤害。