DNA连接酶、RNA连接酶、多核苷酸激酶和DNA聚合酶的同时分离纯化

本文报道从T4amN82噬菌体诱导的大肠杆菌E.coliB 同时分离和纯化四种酶的一般方法。先用硫酸链霉素沉淀把RNA连接酶,DNA连接酶与多核苷酸激酶和DNA聚合酶加以分离。然后用DEAE纤维素柱层析把DNA连接酶与RNA连接酶加以分离,用DEAE-Sephadex-A50柱层析把多核苷酸激酶与DNA聚合酶加以分离。本文着重介绍T4DNA聚合酶的分离纯化。     

从agarose胶回收DNA的方法

到目前为止,已经建立了很多从agarose胶回收DNA的方法,但所有这些方法中没有一种令人完全满意。两个主要的问题是:第一,大部分agarose均被硫粘多糖所污染,当抽提DNA时,它们被一起抽提出来。     

λ[ 3H]DNA的制备和酶制剂中污染的核酸外切酶的检测

本文介绍一种简便制备λ[ ³H]DNA的方法。用该方法制备λ[ ³H]DNA,每升培养物可得10mg以上的产物。比放射性为6.75×10⁴cpm／μGλDNA,酸不溶的放射性产物达99%以上。用单链和天然的λ[ ³H]DNA作底物,能方便地检测出酶制剂中极微量的核酸外切酶Ⅰ与Ⅱ和Ⅲ的污染活性。