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pDVWS501为含有登革2型病毒全长cDNA的质粒, 可利用感染性转录体技术恢复为有活力的病毒MON501. 将MON501注射乳鼠脑内可引发脑炎症状, 其E蛋白的62, 203位分别为Glu, Asn. 采用OL-PCR方法把pDVWS501 E62位氨基酸突变为Lys, 得到质粒TB62; E203位氨基酸突变为Asp, 得到质粒TB203. 将pDVWS501, TB62和TB203酶切后体外转录得到全长登革2型病毒转录体, 应用电穿孔技术转染BHK-21细胞, 7天后收毒. RT-PCR证实有登革2型病毒存在, 接种C6/36细胞, 3~5 d可使其产生典型病变. 测定突变区域的序列, 结果表明得到了恢复病毒MON501和E62, E203位点突变的重组病毒HFT62, HFT203. 3株病毒均在其基因组5′端加“G”, 3′端则与登革2型病毒野生株相同. 分别将3株病毒稀释至105~ 102 TCID50, 经脑内途径注射1日龄乳鼠, 发现与MON501相比, HFT62, HFT203在同一稀释度发病乳鼠的个数减少, 发病时间延长且差异显著, 表明E62, E203可能是登革2型病毒乳鼠神经毒力相关位点. 相似文献
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SARS-CoV 中国株基因组全长cDNA的构建及其恢复病毒的生物学性质 总被引:1,自引:0,他引:1
严重急性呼吸综合征是SARS_CoV引起的一种重要新发传染病,其致病机制的研究对于防治该病十分必要。为了利用反向遗传学技术研究SARS_CoV的致病机制,将覆盖SARS_CoV BJ01株基因组全长的7个cDNA片段纯化后进行体外连接,构建基因组全长cDNA分子,以其为模板,使用 T7 RNA 聚合酶系统在体外进行转录, 获得病毒RNA。用电穿孔转染法将转录体RNA导入Vero E6细胞,可观察到典型的SARS_CoV致细胞病变作用。对收获的恢复病毒采用 RT_PCR方法进行鉴定,结果表明获得的恢复病毒与SARS_CoV BJ01株原病毒序列一致。以针对SARS_CoV的抗体对感染细胞作间接免疫荧光反应,证明获得了具有特异感染性的恢复病毒。同时用细胞病变法和空斑试验测定了恢复病毒及其亲本毒株的病毒滴度, 结果表明二者在致病性上没有明显差异,恢复病毒具有与原型株相似的生物学特性。SARS_CoV BJ01株基因组全长cDNA的成功构建及对恢复病毒生物学性质的研究将为进一步探索SARS_CoV致病的分子机制及研制新型疫苗奠定良好的基础。 相似文献
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浙江海产蟹类 总被引:4,自引:0,他引:4
浙江海产蟹类舟山部分已经发表(《浙江师范学院学报》1956:273—282)。1957年夏季从浙江北部(海礁、洒礁、黄龙、岱山)、浙中(象山、勺溪、三门湾、大陈岛)、浙南(温州、乐清、扑头、洞头、大三盘、北麂)沿海和列岛进行调查。1961—1962年又参加浙江海洋水产资源调查。获得了不少资料,尤其是浙江近海广阔的大陆棚内,在等深线20—60米的海区所分布的一些种类,是以往历年调查所没有获得的自然资源。还参阅了浙江博物馆历年在浙江海区所搜集的蟹类一部分,共计101种,分隶于14科57属,大部分是潮间带、近海的浅海和河口种类。经济价值较高,大部分可供食用,有的可作为养殖对象,小型成体或幼体是经济鱼类的重要天然饵料,部分淡水及咸淡水生活的种类,是人 相似文献
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浙江沿海游泳虾类报告II 总被引:8,自引:1,他引:8
本文是继浙江沿海游泳虾类报告,陆续在浙江沿海采集,获得一些标本。又于1960年3月至1961年12月二次参加浙江省海洋水产资源调查期间,从浮游与底栖生物调查中增添了不少新材料,特别是分布在浙江近海的外缘 相似文献
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siRNA对SARS冠状病毒复制的抑制作用 总被引:7,自引:0,他引:7
为探讨siRNA在哺乳动物细胞中对SARS冠状病毒复制的抑制作用,针对BJ0 1株SARS冠状病毒复制酶基因(Pol)和刺突蛋白基因(S) ,设计4个siRNA ,并构建相应的siRNA表达载体及克隆细胞系.利用间接免疫荧光法及实时定量反转录PCR法,检测所设计的siRNA对SARS冠状病毒复制的抑制作用.结果表明,针对Pol基因的siRNA(psOe)在Vero细胞中可阻断BJ0 1株SARS病毒RNA的复制及其蛋白的表达.该结果为深入阐明SARS冠状病毒的致病机理及探讨SARS病毒防治新途径奠定了基础. 相似文献