miR-29b对TNF—α诱导的人脐静脉内皮细胞增殖与凋亡的影响

目的探索过表达miR-29b对TNF-α 诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）增殖与凋亡的影响及初步作用机制。方法MTT 法筛选TNF—α诱导HUVECs的最佳浓度和时间,建立细胞凋亡模型;MTY法筛选miR-29bmimic转染HUVECs的最佳转染时间和浓度：MTr法检测过表达miR-29b对TNF-α诱导HUVECs增殖活力的影响;Hoechst33342荧光染色检测过表达miR-29b对TNF—α诱导HUVECs凋亡的影响：Western印迹技术检测过表达miR-29b对Akt磷酸化水平、Bcl-2蛋白表达的影响。结果TNF—α诱导的HUVECs凋亡的最佳浓度为10ng／ml,最佳时间是48h;miR-29bmimics转染HUVECs的最佳浓度为50nmol/L,最佳作用时间是48h;过表达miR-29b能显著降低TNF-α诱导的HUVECs的增殖活力（P〈0．001）;Heochst33342荧光染色结果显示。miR-29b过表达能促进TNF-α诱导的HUVECs的凋亡（P〈0．05）;过表达miR-29b能显著下调Akt磷酸化（p-Akt）与Bcl-2蛋白的表达（P〈0．001）。结论过表达miR-29b可降低TNF-α诱导的HUVECs的增殖活力并促进其凋亡,其机制可能与下调Akt磷酸化、Bd-2蛋白的表达相关。     

金樱子总黄酮体外抗氧化活性的研究

本文研究了金樱子总黄酮(RLTF)体外清除自由基的能力,并观察其对过氧化氢诱导损伤的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)抗氧化作用的影响。采用邻苯三酚自氧化法、水杨酸法、DPPH法分别测定RLTF对超氧阴离子自由基(O-·2)、羟自由基(·OH)、二苯代苦味酰基自由基(DPPH·)的清除率;Hoechst染色法分析各组细胞凋亡情况;MTT法测定细胞活力;分光光度法检测各组细胞中SOD、CAT、GSH-Px活性。结果显示,在20~200μg范围内,随着样品加入量增大,RLTF对·OH和DPPH·的清除率逐渐增大,而对O-·2的清除率则是先增大后减少;RLTF对O-·2的清除作用偏低,对·OH的清除率与芦丁相当,对DPPH·的清除能力则强于芦丁而弱于Vc。Hoechst染色观察结果表明RLTF预处理细胞后,能明显提高细胞的抗凋亡作用。与H2O2损伤组比较,不同浓度RLTF预处理组的细胞活力均显著升高(P0.01);不同浓度RLTF预处理组细胞中的SOD、CAT和GSH-Px活性均明显增加(P0.01),且呈剂量依赖性。上述结果表明,RLTF具有较强的自由基体外清除能力,能有效提高氧化损伤HUVEC细胞中SOD、CAT、GSH-Px的酶活性,其可能通过清除细胞内自由基和提高细胞抗氧化酶活性来提高细胞的抗氧化活性。