猪瘟病毒E2蛋白主要抗原域的高效表达及间接ELISA方法的初步建立

重组质粒pET-2e转化宿主菌BL21(DE3),以IPTG进行诱导表达,比较不同诱导条件下目的蛋白的表达量,确定其最佳表达条件,使外源基因获得了较高水平的表达,可达茵体蛋白总量的36．6％。Western-blot检测表明表达产物具有良好的免疫反应原性。将收集的纯培养物进行超声波裂解后以镍亲和层析柱纯化回收目的蛋白,再以纯化后的目的蛋白作为包被抗原进行方阵滴定试验,确定了目的蛋白作为包被抗原的最佳稀释度,初步建立了检测CSF血清抗体水平的间接ELISA方法。以此方法建立的间接ELISA方法对收集的约120头份血清样品进行检测,结果显示：使用囊素与疫苗共同免疫猪的血清抗体水平明显高于未加囊素组猪的血清抗体水平,与以往的报道一致,为以CSFV重组蛋白作为抗原建立的间接ELISA方法的标准化奠定基础。     

MES23.5细胞酪氨酸羟化酶的种属来源及其重组酶的活性测定

MES 2 3 5细胞作为研究神经变性疾病的工具 ,是一种杂交瘤性多巴胺能神经元细胞系 ,由大鼠胚胎中脑细胞与小鼠神经母细胞瘤 胶质瘤细胞系N18TG2杂交而成 .其酪氨酸羟化酶 (tyrosinehydroxylase ,TH)的动物种属来源不清楚 .应用反转录聚合酶链反应 (RT PCR)法从MES 2 3 5细胞系中克隆了编码TH的cDNA ;结构分析表明 ,其cDNA编码区由 14 97碱基构成 ,共编码 4 98个氨基酸 ,与大鼠和小鼠TH的同源程度分别为 93%和 10 0 % .该杂交瘤细胞系表达小鼠TH .将该cDNA亚克隆至原核表达载体pGEX 4T 1,经原核细胞表达、亲和层析得到了电泳纯的基因重组小鼠TH(recombinantmousetyrosinehydroxylase ,rmTH) .改良和建立了一种体外分析TH活性的新方法 .活性分析证明 ,纯化的rmTH能催化L 酪氨酸发生加单氧反应生成L 3,4 二羟基苯丙氨酸 (L 多巴 ) .rmTH的表观分子量为 5 6kD ;其酶促加单氧反应的最适pH值为 7 0 .乙二胺四乙酸能显著抑制此酶的活性 ,而亚铁离子能明显增强其活性 .     

失效模式与效应分析在化疗药物安全输注中的应用

目的运用失效模式与效应分析（FMEA）降低化疗药物输注过程中的风险,保证输注安全。方法根据FMEA方法,成立项目小组;制定操作流程图,进行失效模式与潜在风险原因分析,计算优先风险指数（RPN）;找出失效模式及原因;进行措施改进。结果 2012年1~5月与前年同期比较,化疗药物外渗和静脉炎的发生率差异有统计学意义（0.1%vs 0.6%;0.6%vs 1.5%,P〈0.05）。结论 FMEA应用于化疗患者,能显著降低静脉炎和药物外渗发生的风险,保证患者安全。     

猪瘟病毒保护抗原E2和猪IgG重链基因的合成及其表达蛋白

根据已发表文献及DNAstar软件分析 ,选取双拷贝Shimen株猪瘟病毒E2基因A ,D区和猪IgG重链中可与SPA非特异性结合的区域作为目的基因进行串联表达。根据GenBank发表的序列 ,Primer5 0软件的辅助下分别设计三对引物 ,并在扩增第二条和第三条片段的上游引物 5′端分别设计一个长 5个氨基酸的Linker,将扩增的三片段串联克隆入原核表达载体pET 32a中 ,构建成重组质粒pET 2eh ,对重组质粒诱导表达 ,表达蛋白经纯化后标记于CowanⅠ株金黄色葡萄球菌SPA上 ,与收集的 80份待检血清进行平板凝集试验 ,结果与现有诊断试剂盒检测结果具有较好的符合性。该方法具有简单 ,快速 ,敏感 ,易于操作的特点。     

肿瘤患者多重耐药菌感染的护理体会

多重耐药菌(MDR)是指同时对两类或两类以上抗菌药物产生耐药性的细菌。临床上常见的MDR主要有耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、耐万古霉素肠球菌、多重耐药的鲍曼不动杆菌、产超广谱β-内酰胺酶细菌。MDR感染现已遍布全球,在社区或医院中可引起散发、交叉传播,甚至爆发流行。对婴幼儿、免疫缺陷者和老年人的威胁尤大[1]。MDR感染应用常用抗生素,如β-内酰胺类、氨基糖苷类、氟喹诺酮类、大环内酯类和四环素类等,效果欠佳,故已成为治疗上的棘手问题,并伴有较高的病死率[2]。因此,如何采取有效的措施,预防和控制MDR的传播,已势在必行。现将大连医科大学第二临床学院肿瘤科对MDR患者的护理体会报告如下。1一般资料收     

基于遥感生态指数和图论知识的宁波市生态安全格局构建

构建生态安全格局、识别生态重要区域是目前区域生态安全研究的重点。本研究以宁波市为例,利用遥感生态指数识别生态源地,利用电路理论模型识别生态廊道和生态夹点,利用图论算法识别最小生成树和割边。结果表明：宁波市共有生态源地203处,土地覆被类型以林地为主,也包括少量的水田和水淹植被;生态廊道共368条,总长度为573.42 km,整体呈西南密、东北疏的趋势;生态夹点91处,夹点主要分布在海涂区域和联系紧密的生态源地之间。根据现状提出优化策略,确定一级廊道187条,二级廊道181条,生态修复优先区50处,远期生态修复区59处。结合图论与电路理论模型的优化策略为生态安全格局的构建提供了科学依据。