胆碱脱氢酶的动力学性质

本文对增溶胆碱脱氢酶的稳态初速度及产物抑制动力学做了。底物胆碱和ＰＭＳ的相互影响：变化一个底物的浓度,另一个底物的Ｋｍ及Ｖｍａｘ均变化。该酶的产物三甲胺 地 制表现为对底物胆碱非竞争性而地ＰＭＳ竞争性,在胆碱饱和的情况下,三甲胺乙醛对酶的抑制仍表现为对ＰＭＳ竞争性。这些结果表明增溶胆碱脱氢酶的催化机制搂双底物双产物乒乓机制。１－ＰＣ与９－ＡＣ对增溶胆碱脱氢酶均有抑制作用,且均为混和型抑制,Ｋ１分别     

胆碱脱氢酶的N端氨基酸序列测定

采用SDS-PAGE凝胶电泳及电转移方法,将增溶的鼠肝线粒体胆碱脱氢酶进一步纯化,且去掉增溶线粒体胆碱脱氢酶(CDH)中所包含的大部分磷脂、去垢剂、辅基FAD等. 对进一步纯化的CDH进行了N端氨基酸序列测定,得到CDH N端10个氨基酸残基序列为VAAAAGGGKD,这一部分序列与小鼠CO5蛋白(即补体C5的前体蛋白)、大鼠腺苷酰(基)环化酶(adenylyl cyclase)、人甾体结合蛋白(oxysterol-binding protein)有很高同源性,但与大肠杆菌CDH并无明显的同源性.     

胆碱脱氢酶光谱性质的研究

胆碱脱氢酶（ＣＤＨ）蛋白质部分内源荧光发射峰在３３５ｎｍ,并不受底物的影响,但底物可改变辅基ＦＡＤ部分的内源荧光光谱。应用ＦＴＩＲ技术研究了增溶ＣＤＨ的二级结构,其结果如下：５３．４％α－螺旋,２４．５％β－片层,１３．９％３１０－螺旋及０．５％β－回折。在ＣＤＨ处于非底物结合状态时,分子内部结构表现为α－螺旋以及β－片层优势构象,呈现出球状蛋白样的空间结构特征。在与底物作用过程中,３１０－螺旋的比例逐渐上升至４２％左右,与此同时α－螺旋结构则降低到３５％。提示了底物诱导ＣＤＨ分子内部发生了蛋白分子的重新折叠。     

胆碱脱氢酶的底物保护作用

胆碱脱氢酶（ＣＤＨ）是线粒体电子传递酶系的一个重要组成,它位于线粒体内膜。膜固有的ＣＤＨ与用去垢剂从线粒体上增溶下来的酶在性质上有一定差异,本文研究了温度、ＳＤＳ对增溶ＣＤＨ的失活作用,发现底物胆碱的存在有明显的保护作用,说明底物诱导ＣＤＨ产主构象变化．     

胆碱脱氨酶光谱性质的研究

胆碱脱氢酶（ＣＤＨ）蛋白南部分内源荧光发射峰在３３５ｎｍ,并不受底物的影响,但底物可改变辅基ＦＡＤ部分的内源荧光光谱。应用ＦＴＩＲ技术研究了增溶ＣＤＨ的二级结构,其结果如下：５３．４％α螺旋,２４．５％β－片层,１３．９％３１０－螺旋及０．５％β回折。在ＣＤＨ处于非底物结合状态时,分子内部结构表现为α－螺旋以及β－片怪优势构象,呈现出球状蛋白样的空间结构特征,在与底物作用过程中,３１０－螺旋的比例     

胆碱脱氢酶的变性及其构象研究

增溶胆碱脱氢酶在较低的ＰＨ条件下易于失活，底物胆碱的存在有助于提高基ＰＨ稳定性。热变性酶蛋白分子中β结构所占比例上升，α螺旋结构比例下降，其中β结构的变化主要来自于β回折和３１０螺旋的贡献，底物对ＣＤＨ的热变性具有一定的保护作用。