人β防御素3 融合蛋白在大肠杆菌中的表达、纯化与活性分析

近年来由于抗生素的不规范使用等多种原因,细菌耐药问题日益严重,人们正努力从各个方面来解决,其中机体天然产生的肽抗生素(peptide antibiotics)由于其对耐药菌的强大抗菌作用而受到人们的关注。肽抗生素是一种阳离子小分子多肽,在天然免疫和获得性免疫中都发挥着重要作用。防御素(defensin)是肽抗生素中较为重要的一种,主要来源于皮肤、呼吸道等的上皮组织,是正常机体抵抗外界病原微生物入侵的重要防线。人β防御素3(human betadefensin 3,hβD-3)参与人体免疫屏障,并因具有广谱抗菌和抗菌活性不被盐离子浓度抑制等特点而具特别的研究开发价值。提取中国人扁桃体组织总RNA,以RT-PCR技术扩增编码hβD-3成熟肽的cDNA并构建于原核表达载体pQE-80L,IPTG诱导表达后利用SDS-PAGE、免疫印记等方法对重组蛋白进行分析。重组蛋白表达量达到细菌表达总量的40%。重组蛋白自表达菌包涵体中提取后,经亲和层析法纯化目的蛋白达到电泳纯,经多步透析法复性,在体外抗菌实验中表现出了对金黄色葡萄球菌、多重耐药金黄色葡萄球菌等的抗菌活性,为进一步的研究和开发奠定了基础。     

双语和互动式教学在八年制临床医学生物化学教学中的探索与实践

生物化学作为一门基础医学课,是任何学制医学专业学生的必修课,如何有效完成八年制对本课程的更高要求,需要探索适合本专业的教学方法.我们综合运用双语和互动教学法,扩大双语教学的授课范围并强化专业英语的掌握与使用,同时加强互动,不仅使学生牢固掌握了课程的专业知识,也为更高层次的学习打下了良好的基础.通过对两届八年制学生<生物化学>双语和互动式教学模式的探索和尝试,目前已经取得了较好的效果.     

19S调节复合体中亚基之间的相互关系

26Ｓ蛋白酶体是真核细胞内最主要的非溶酶体蛋白水解酶 ,它降解泛素化的底物蛋白质 ,在调节必需的胞内生命活动 (如细胞周期、抗原提呈、转录、信号转导 )中发挥着重要作用。 2 6Ｓ蛋白酶体是多亚基复合体 ,由两个亚复合体 2 0Ｓ降解核心和 19Ｓ调节复合体 (亦称ＰＡ70 0 )组成 (图 1) ,它们与在古细菌发现的蛋白酶体有高度的同源性[1] 。底物蛋白质与泛素单体结合后 ,被 2 6Ｓ蛋白酶体识别并进入到其内部的水解空间被降解。 2 0Ｓ颗粒是底物蛋白质的水解中心。 19Ｓ调节复合体 (19Ｓｒｅｇｕｌａｔｏｒｙｃｏｍ ｐｌｅｘ ,以下简称 19ＳＲ…     

人APRIL105-250基因的克隆与表达

目的 :克隆并表达人可溶性增殖诱导配体 (sAPRIL ,即人APRIL_105-250) ,为探索其在多种肿瘤细胞的增殖和存活以及促肿瘤形成中的作用奠定基础。方法 :从GENBANK中查找人APRIL蛋白 (编号:07588)序列 ,取其部分胞外 (APRIL_105-250)序列设计引物 ,用RT PCR从扁桃体总RNA中扩增出人APRIL_105-250基因 ,测序后将克隆载体经酶切并构建表达载体 ,在大肠杆菌中表达 ,并纯化蛋白。结果 :经克隆测序后进行同源比较 ,证实所克隆的基因即为人APRIL_105-250 基因。在大肠杆菌中表达量达 43.6% ,获得纯化蛋白。结论 :成功克隆与表达、纯化了人APRIL_105-250基因 ,为深入研究其功能奠定了基础 。     

人LNα4LG4-5在毕赤酵母中的表达研究

为实现人层粘连蛋白α4链LG4-5组件(Human Laminin Alpha4Chain LG4-5Module,hLNα4LG4-5)蛋白的分泌表达,采用DNA重组技术将hLNα4LG4-5cDNA片段插入分泌型酵母表达载体pPICZαA中,构建了相应的重组表达质粒pPICZαA-LG45并在GS115毕赤酵母菌株中表达,纯化蛋白后进行细胞学实验证明,hLNα4LG4-5有明显促进肿瘤细胞粘附和扩展的作用,为深入研究LG4-5组件结构与功能奠定了基础。     

DNA聚合酶iota在HEK-293细胞中高表达体系的建立

目的:将带有DNA聚合酶iota(DNA Polymerase iota,Polι)目的基因的真核表达质粒PCDNA3.1转入HEK-293细胞,建立DNA聚合酶iota在HEK-293细胞中的高表达体系,为进一步研究DNA聚合酶在DNA损伤修复中的生物学功能奠定了基础.方法:用脂质体2000(Lipofectamine2000)将带有目的基因的真核表达质粒PCDNA3.1转入HEK-293细胞,通过G418筛选抗性克隆,用一步法提取细胞总RNA,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术检测出高表达克隆.结果:通过G418筛选筛选出了具有G418抗性的克隆,通过RT-PCR技术检测出高表达DNA聚合酶iota的HEK-293细胞系.结论:建立了高表达DNA聚合酶iota的HEK-293细胞系.为进一步研究DNA聚合酶在DNA损伤修复中的生物学功能奠定了基础.     

增殖诱导配体(APRIL)研究进展

增殖诱导配体 (aproliferation inducingligand ,APRIL)是肿瘤坏死因子 (TNF)家族的新成员 ,在多种肿瘤组织中有高表达 ,能促进肿瘤细胞增殖 ,防止肿瘤细胞受CD95L、FasL等诱导的凋亡 ;调节体液免疫 ;并在T、B淋巴细胞的成熟和活化中起一定作用。因此 ,APRIL与肿瘤的发生、发展以及免疫系统的调节有密切关系。     

Th表位修饰的BLyS突变体的构建及活性分析

在已克隆可溶性BLyS(sBLyS)cDNA的基础上,经PCR构建了其缺失不同区域的突变体(msBLyS)cDNA,然后将msBLyScDNA与卵清蛋白(ovalbumin,OVA)Th表位DNA序列重组,测序正确后分别克隆于原核表达载体pQE80L,并转化E.coliDH5α,经IPTG诱导后,融合蛋白以包涵体的形式表达,表达量均在菌体总蛋白的30%以上。包涵体经洗涤、溶解并经Ni-NTA层析纯化后,目的蛋白的纯度均在90%以上。活性检测发现,所获重组蛋白均丧失了sBLyS所具有的生物学功能,这些工作的完成为进一步探讨其治疗作用打下了基础。     

可溶性人TRAIL分子的制备及其抗肿瘤活性

TRAIL(TNF relatedapoptosis inducingligand)是1 995年发现的一个新的TNF超家族成员.使人感兴趣的是该分子既可广泛介导多种组织来源的肿瘤细胞发生凋亡而基本不影响正常细胞的功能,也可引起许多对于FasL和TNF α有抗性的细胞凋亡[1 ,2 ] .因此,有可能成为一种新的抗肿瘤药物.     

bcl—2和IL—1和TNFα表达的调节作用初探

通过将反义ｂｃｌ－２基因转梁于Ｕ９３７细胞,建立了Ｂｃｌ－２蛋白表达受抑的Ｕ９３７细胞模型,证实了模型细胞的增殖和存活表型授课和线菌素Ｄ－结晶紫试验和ＥＬＩＳＡ检测表明模型细胞上清中ＴＮＦα的活性和含量无明显变化,小鼠胸腺细胞增殖试验表明模型细胞上清中ＩＬ－１活性升高,提示ｂｃｌ－２的表达对ＴＮＦα的表达无明显影响,但可能在一定程度上抑制了ＩＬ－１的表达或活性。